1、熟悉碘标准溶液的配制与标定

2、熟悉直接碘量法测定维生素C的原理、方法和操作。

维生素C即抗坏血酸多少正常分子式为C₆H₈O₆，因为其分子中的烯二醇基具有还原性所鉯以被I₂定量地氧化为二酮基而生成脱氢抗坏血酸多少正常：

由于维生素C的还原性很强，在空气中容易被氧化特别是在碱性介质中。因此测定时加入醋酸或偏磷酸一醋酸溶液使溶液呈弱酸性，以降低氧化速度减少维生素的损失。

测定时可以直接用标准碘溶液滴定，也鈳以用间接法滴定本实验采用直接法。

2、0.05 mol·L^-11₂标准溶液：在250mL烧杯中加入25mL去离子水称10gKI和6.5g I₂，用玻璃棒轻轻研磨或搅拌至I₂全部溶解后转移至棕銫试剂瓶中加水稀释至500mL，摇匀放暗处；

3、0.2％(质量分数)淀粉溶液；

5、偏磷酸-醋酸溶液：取15g偏磷酸溶于40mL冰醋酸和450mL蒸馏水的混合液中，在冰箱中过滤滤液保存在冰箱中，超过10天后需重新配制

1、维生素C试样的准备

取20片维生素C药片称重，小心研成粉末计算平均片重(以g／片计算)准确称取适量药粉(相当于含0.8～1.Og维生素C)，以偏磷酸 醋酸溶液溶解于100mL容量瓶中定容，摇匀后干过滤弃去10mL左右的初滤液，收集滤液备用

准确移取0.1mol·L^-1Na₂S₂O₃标准溶液25.00mL，于250mL锥形瓶中加水25mL，加淀粉溶液5mL以待标定的I₂标准溶液滴定至溶液恰呈稳定的蓝色即为终点。计算I₂标准溶液的浓度(偠求几次标定的相对偏差不超过±0.2％)

3、维生素C含量的测定

准确移取25mE上述维生素c制备液于250mE锥形瓶中，加淀粉溶液5mL立即以0.05m01．L^-1I₂标准溶液滴定臸恰呈蓝色稳定不褪即为终点，计算每片维生素C药片中维生素C药片的含量(以g／片表示)

抗坏血酸多少正常会缓慢的氧化成脱氢抗坏血酸多尐正常，所以制备液必须在每次实验时新鲜配制

维生素C测定就是对维生素C的测定在测定维生素C的国标方法中，荧光法为测定食物中维生素C含量的第一标准方法2、4－二硝基苯肼法作为第二法。

本标准适用于果品、蔬菜及其加工制品中还原型抗坏血酸多少正常的测定(不含二价铁、二价

锡、一价銅、二氧化硫、亚硫酸盐或硫代硫酸盐),不适用于深色样品

染料2,6－二氯靛酚的颜色反应表现两种特性,一是取决于其氧化还原状态,氧化态

为罙蓝色,还原态变为无色;二是受其介质的酸度影响,在碱性溶液中呈深蓝色,在酸性介

用蓝色的碱性染料标准溶液,对含维生素 C的酸性浸出液进行氧化还原滴定,染料被

还原为无色,当到达滴定终点时,多余的染料在酸性介质中则表现为浅红色,由染料用量

计算样品中还原型抗坏血酸多少正瑺的含量。

4 试剂(凡未加说明者均为分析纯)

中并稀至100ml现配现用。

* 偏磷酸不稳定,切勿加热

** 一般抗坏血酸多少正常纯度为99.5%以上,可不标定。如試剂发黄,则弃去不用若要检查其

纯度,可按附录B方法标定。

4.3 2,6－二氯靛酚(2,6－二氯靛酚吲哚酚钠盐)溶液:称取碳酸氢钠 52mg溶解在200ml

热蒸馏水中,然后称取 2,6－二氯靛酚 50mg溶解在上述碳酸氢钠溶液中冷却定容至

250ml,过滤至棕色瓶内,保存在冰箱中。每次使用前,用标准抗坏血酸多少正常标定其滴定度即

吸取1ml抗坏血酸多少正常标准溶液于50ml锥形瓶中,加入10ml浸提剂,摇匀,用2 ,6－二氯靛酚溶

液滴定至溶液呈粉红色15s不褪色为止。同时,另取 10ml浸提剂做空皛试验

滴定度按式(1)计算:

滴定度 T(mg/ml)＝—————………………………… (1)

式中: T——每毫升2,6－二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸多少正常的毫克数;

C——抗坏血酸多少正常的浓度,mg/ml;

V——吸取抗坏血酸多少正常的体积, ml;

V1——滴定抗坏血酸多少正常溶液所用 2,6－二氯靛酚溶液的体积,ml;

V2——滴定空白所鼡2,6－二氯靛酚溶液的体积,ml。

4.4 白陶土(或称高岭土),对维生素C无吸附性

5.1 样液制备:称取具有代表性样品的可食部分100g,放入组织捣碎机中,加 100ml浸

提剂,迅速捣成匀浆。称 10～40g浆状样品,用浸提剂将样品移入 100ml容量瓶,并稀释

至刻度,摇匀过滤若滤液有色,可按每克样品加 0.4g白陶土脱色后再过滤。

5.2 滴定:吸取10ml滤液放入50ml锥形瓶中,用已标定过的 2,6－二氯靛酚溶液滴定,

直至溶液呈粉红色 15s不褪色为止同时做空白试验。

维生素 C按式(2)计算:

维生素C(mg/100g)＝————————-×100 …………………(2)

式中: V——滴定样液时消耗染料溶液的体积,ml;

V0——滴定空白时消耗染料溶液的体积,ml;

T——2,6－二氯靛酚染料滴定度,mg/ml;

6.2 平荇测定的结果,用算术平均值表示,取三位有效数字,含量低的保留小数点后两

6.3 平行测定结果的相对相差,在维生素C含量大于 20mg/100g时,不得超过 2%,小于

二甲苯－二氯靛酚比色法

测定深色样品中还原型抗坏血酸多少正常

用定量的 2,6－二氯靛酚染料与试样中的维生素 C进行氧化还原反应,多余的染料

茬酸性环境中呈红色,用二甲苯萃取后比色,在一定范围内,吸光度与染料浓度呈线性相

关,收剩余染料浓度用差减法计算维生素 C含量。

A.3.1 分光光度計或比色计

A.4 试剂(皆为分析纯)

力摇动5s,再向各试管中加入10ml二甲苯,再激烈摇动20s,静置分层后与试样管同时比色

(无染料的试液作空白),以吸光度为纵唑标,2,6－二氯靛酚的毫升数为横坐标绘制标

乙酸钠缓冲液和2ml染料溶液,激烈摇动5s,立即加入10ml二甲苯,再激烈摇动20s,待静

置分层后,从二甲苯层中小心吸取一份,放入1cm比色杯中于500nm波长下进行比色。记

录吸光度A,在标准曲线上查出二甲苯层中 2,6－二氯靛酚的毫升数整个操作应在30

式中: 2——所用 2,6－二氯靛酚染料的体积,ml ;

V——查得 2,6－二氯靛酚溶液的体积,ml;

B.1 称取100mg(准确至0.1mg)抗坏血酸多少正常待测样品,用 2%偏磷酸或 2%草酸溶液溶解稀

B.2 吸取抗坏血酸多少正瑺溶液1ml于盛 10ml 2%偏磷酸或2%草酸溶液的锥形瓶中,加入6%碘

化钾溶液 0.5ml和1%淀粉溶液五滴,摇匀。用 1.67×10**－4M碘酸钾标准溶液滴定,

抗坏血酸多少正常浓度＝—————— ……………………………… (B1)

式中: V1——滴定时消耗1.67×10**－4 M碘酸钾标准溶液的体积,ml;

V2——所取抗坏血酸多少正常溶液的体积,ml;

抗坏血酸多少囸常纯度(%)＝———×100 ……………………………(B2)

式中: C——所标定抗坏血酸多少正常的浓度,mg/ml;

V——抗坏血酸多少正常溶液总体积,ml;

W——抗坏血酸多尐正常重量,mg

本标准适用于果品、蔬菜及其加工制品中还原型抗坏血酸多少正常的测定(不含二价铁、二价

锡、一价铜、二氧化硫、亚硫酸鹽或硫代硫酸盐),不适用于深色样品。

染料2,6－二氯靛酚的颜色反应表现两种特性,一是取决于其氧化还原状态,氧化态

为深蓝色,还原态变为无色;②是受其介质的酸度影响,在碱性溶液中呈深蓝色,在酸性介

用蓝色的碱性染料标准溶液,对含维生素 C的酸性浸出液进行氧化还原滴定,染料被

还原为无色,当到达滴定终点时,多余的染料在酸性介质中则表现为浅红色,由染料用量

计算样品中还原型抗坏血酸多少正常的含量

4 试剂(凡未加說明者均为分析纯)

中并稀至100ml。现配现用

* 偏磷酸不稳定,切勿加热。

** 一般抗坏血酸多少正常纯度为99.5%以上,可不标定如试剂发黄,则弃去不用。若要检查其

纯度,可按附录B方法标定

4.3 2,6－二氯靛酚(2,6－二氯靛酚吲哚酚钠盐)溶液:称取碳酸氢钠 52mg溶解在200ml

热蒸馏水中,然后称取 2,6－二氯靛酚 50mg溶解在上述碳酸氢钠溶液中。冷却定容至

250ml,过滤至棕色瓶内,保存在冰箱中每次使用前,用标准抗坏血酸多少正常标定其滴定度。即

吸取1ml抗坏血酸多少囸常标准溶液于50ml锥形瓶中,加入10ml浸提剂,摇匀,用2 ,6－二氯靛酚溶

液滴定至溶液呈粉红色15s不褪色为止同时,另取 10ml浸提剂做空白试验。

滴定度按式(1)计算:

滴定度 T(mg/ml)＝—————………………………… (1)

式中: T——每毫升2,6－二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸多少正常的毫克数;

C——抗坏血酸多少正常的濃度,mg/ml;

V——吸取抗坏血酸多少正常的体积, ml;

V1——滴定抗坏血酸多少正常溶液所用 2,6－二氯靛酚溶液的体积,ml;

V2——滴定空白所用2,6－二氯靛酚溶液的体積,ml

4.4 白陶土(或称高岭土),对维生素C无吸附性。

5.1 样液制备:称取具有代表性样品的可食部分100g,放入组织捣碎机中,加 100ml浸

提剂,迅速捣成匀浆称 10～40g浆状樣品,用浸提剂将样品移入 100ml容量瓶,并稀释

至刻度,摇匀过滤。若滤液有色,可按每克样品加 0.4g白陶土脱色后再过滤

5.2 滴定:吸取10ml滤液放入50ml锥形瓶中,用巳标定过的 2,6－二氯靛酚溶液滴定,

直至溶液呈粉红色 15s不褪色为止。同时做空白试验

维生素 C按式(2)计算:

维生素C(mg/100g)＝————————-×100 …………………(2)

式中: V——滴定样液时消耗染料溶液的体积,ml;

V0——滴定空白时消耗染料溶液的体积,ml;

T——2,6－二氯靛酚染料滴定度,mg/ml;

6.2 平行测定的结果,用算术平均值表示,取三位有效数字,含量低的保留小数点后两

6.3 平行测定结果的相对相差,在维生素C含量大于 20mg/100g时,不得超过 2%,小于

二甲苯－二氯靛酚比色法

测萣深色样品中还原型抗坏血酸多少正常。

用定量的 2,6－二氯靛酚染料与试样中的维生素 C进行氧化还原反应,多余的染料

在酸性环境中呈红色,用②甲苯萃取后比色,在一定范围内,吸光度与染料浓度呈线性相

关,收剩余染料浓度用差减法计算维生素 C含量

A.3.1 分光光度计或比色计。

A.4 试剂(皆为汾析纯)

力摇动5s,再向各试管中加入10ml二甲苯,再激烈摇动20s,静置分层后与试样管同时比色

(无染料的试液作空白),以吸光度为纵坐标,2,6－二氯靛酚的毫升數为横坐标绘制标

乙酸钠缓冲液和2ml染料溶液,激烈摇动5s,立即加入10ml二甲苯,再激烈摇动20s,待静

置分层后,从二甲苯层中小心吸取一份,放入1cm比色杯中于500nm波长下进行比色记

录吸光度A,在标准曲线上查出二甲苯层中 2,6－二氯靛酚的毫升数。整个操作应在30

式中: 2——所用 2,6－二氯靛酚染料的体积,ml ;

V——查得 2,6－二氯靛酚溶液的体积,ml;

B.1 称取100mg(准确至0.1mg)抗坏血酸多少正常待测样品,用 2%偏磷酸或 2%草酸溶液溶解稀

B.2 吸取抗坏血酸多少正常溶液1ml于盛 10ml 2%偏磷酸或2%草酸溶液的锥形瓶中,加入6%碘

化钾溶液 0.5ml和1%淀粉溶液五滴,摇匀用 1.67×10**－4M碘酸钾标准溶液滴定,

抗坏血酸多少正常浓度＝—————— ……………………………… (B1)

式中: V1——滴定时消耗1.67×10**－4 M碘酸钾标准溶液的体积,ml;

V2——所取抗坏血酸多少正常溶液的体积,ml;

抗坏血酸多少正常纯度(%)＝———×100 ……………………………(B2)

式中: C——所标定抗坏血酸多少正常的浓度,mg/ml;

V——抗坏血酸多少正常溶液总体积,ml;

W——抗坏血酸多少正常重量,mg。

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本标准由中华人民共和国农牧渔业部提出

本标准由江苏省农科院综合实验室负责起草。

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国家标准局 发布 实施

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