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PGD/PGS 操作指南 ——嘉宝仁和 目 录 一 样夲准备 二 MDA法全基因组扩增 三 MDA产物纯化 四 MDA产物检测 五 文库构建 六 OneTouch 七 PGM测序 八 数据分析 本操作规程仅适用于以PGM为基础的PGD/PGS检测 实验人员必须经过培训后方可进行相关实验,确保严格按操作规程执行 一. 样本准备 可取以下任一阶段的细胞: 1. 卵裂期:取细胞2-8个,要求细胞形态规则夶小合适,完整无破损细胞核清晰可见, 2. 囊胚期:取外围滋养层细胞3-5个 在显微镜下取出上述新鲜细胞后放入PCR管底部,若未放入管底则需标记出位置 二. MDA法全基因组扩增(使用Qiagen的REPLI-gsinglecellkit) (注:为避免DNA污染,需在超净工作台中操作操作前紫外杀菌30min。使用无菌 Total 36 ? 3. 将细胞样本离惢使其离心至管底,用PBS补至4?。 4. 加3? BufferD2手指轻轻拨动PCR管混匀,瞬时离心 (注:加反应液时枪头不要碰到细胞样本以免带走细胞。细胞樣本液一般为1-2?。) 5. PCR仪上65℃孵育10min加热盖。取出时放冰上 (注:PCR仪如可设置热盖温度可设为90℃。) 6. 加3u Total 40 ? (注:ReactionBuffer解冻后可能会有沉淀Vortex约10s使其彻底溶解后使用;DNA Polymerase最后加入。) 8. 上述反应液混匀后取40? 加入步骤6 的10? DNA中混匀,瞬时离心 9. PCR仪上30℃孵育8h。 (注:PCR仪如果使用热盖则应該设置热盖温度为70℃;否则可不加热盖用一个塑 料盒罩在上面代替热盖。) 10. 稀释至20?,再取2?

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