1. 由接种环以菌操作沾取少许待分離的材料,在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线,微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少,并逐步分散开来,如果划线适宜的话,微生物能一一分散,经培养后,可在平板表面得到单菌落.

2. 先将待分离的材料用无菌水作一系列的梯度稀释（如 1 ∶ 10 、 1 ∶ 100 、 1 ∶ 1000 、 1 ∶ 10000 …）,然后分别取不同稀释液少许,与已溶化并冷却至 45 ℃左右的琼脂培养基混合,摇匀后,倾入灭过菌的培养皿中,待琼脂凝固后,制成可能含菌的琼脂平板,保温培养一定时间即可出出菌落.如果稀释得当,在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落,这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的.随后挑取该单个菌落,或重复以上操作数次,便可得到纯培养.

3. 先将待分离的材料用无菌水作一系列的梯度稀释（如 1 ∶ 10 、 1 ∶ 100 、 1 ∶ 1000 、 1 ∶ 10000 …）,让后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基表面进行培养当稀释倍数够高时可获得单个细菌形成的菌落

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