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来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2020-02-12 10:24 标签： cat studio

华中科技大学同济医学院附属协囷医院第一临床学院，武汉 430022 华中科技大学同济医学院基础医学院病原生物学系，武汉 430030 摘要 ：目的 构建高效表达结核分枝杆菌抗原肝素結合血凝素 (HBHA)的重组耻垢分枝杆菌 方法 针对结核分 枝杆菌 H37Rv株 HBHA 的编码基 因Rv0475设计特异引物 ，利用 PCR技术从细菌基 因组 中获取 目的基 因并克隆人 pET┅30b(+)载体构建重组原核表达质粒 pETHBHA，经 IPTG诱导 pETHBHA转化 的重组 E．coliBL21(DE3)细菌 Ni柱纯化携带 C一端 His标签的 HBHA蛋 白，并制备 鼠源多克隆抗体 PCR扩增含 自身启动子和调節序列的Rv0475 基 因并克隆人大肠埃希菌一分枝杆菌穿梭载体 pMV261，构建重组分枝杆菌表达质粒 pMVHBHA并经酶切鉴定证实后 ， 电转化人耻垢分枝杆菌涂咘含卡那霉素的7Hll平板 ，挑选抗性克隆并扩大培养 15 SDS~PAGE和Westernblot鉴定 重组耻垢分枝杆菌的表达 。结果 分别成功构建重组原核表达质粒 pETHBHA 和重组分枝杆菌表达质粒 pMVHB— HA；重组蛋 白HBHA在大肠埃希菌 中成功表达并纯化后 BCA蛋 白浓度测定试剂盒测定浓度为 1．9125btg／gL，用其 制备 鼠源多抗 ；证实 HBHA利用其 自身的啟动子和调节序列在重组耻垢分枝杆菌 中表达 结论 成功构建过表达 HB HA的重组耻垢分枝杆菌 ，为研究该蛋 白参与结核病 的致病机制和研发新型疫苗和诊 断试剂奠定 了基础 关键词 ：肝素结合血凝素 (HBHA)； 耻垢分枝杆菌； 结核病 ； 表达 中图分类号 ：R378．91

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