从某一生物基因组的基因组Bam HI文库中获得了3.0kb的片段

1976年H.G. Khorana 提出了用化学方法合成基因的設想并于1979年在science 上发表了率先成功地合成大肠杆菌酪氨酸tRNA 基因的论文。第一节化学合成目的基因

一、目前常用的方法磷酸二酯法、磷酸三酯法、亚磷酸三酯法、固相合成法

1. 磷酸二酯法保证合成反应的定向进行然后再用酸

②带保护的单核苷酸连接

带5’保护的单核苷酸与带3’保护的另一个单核苷酸以磷酸二酯键连接起来。然后去掉一个保护使其循环往复连接。

5’端保护的单核苷酸可以同3’端保护的二核苷酸聚合保护连接去保护连接

原理与磷酸二酯法一样。只是参加反应的单

核苷酸都是在3’端磷酸和5’-OH 上都先连接了一个保护基团2. 磷酸三酯法

固相磷酸三酯合成法将第一个核苷酸的3’-OH 端固定在固相支持物上。(第一个核苷酸不需要保护)

是目前通用的合成方法

化学合成的DNA 片斷一般在200bp 以内。需要把几个正确片段连接起来二、化学合成DNA 片断的组装

用T4多核苷酸激酶使各个片段的5’端带上磷酸

预先设计合成的片断の间都有互补区域,不同片断之间的互补区域形成有断点的完整双链(2)5’端磷酸化

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