ICS．A目园中华人民共和国国家标准GB／T．代替GB／T．發布海洋调查规范第部分：海洋生物调查SpecificationsforoceanographicsurveyPart：Marinebiologicalsurvey实施丰瞀粥紫瓣警襻瞥鐾发布中国国家标准化管理委员会及前言??··??????????????·范围??????·?????????规范性引用文件??????????·术语和定义?··?··?????????一般规定?????????????·．技术设计????????????·．调查要求????··???????··．调查和分析仪器设备???????·．采样·??????????·???．·．样品分析????????????．资料整理及报告编写???·????叶绿素、初级生产力和新生产力的测定····．技术要求和测定要素???????·．海水浮游植物色素测定??????·．海洋初级生产力(“C示踪法)测定??．叶绿素a和初级生产力的粒度分级测定．海洋新生产力(“N示踪法)测定··??·．资料整理??????··??????一微生物调查???·???????·?·．技术要求和调查要素．采样???????．样品分析???·?··．资料整理?????微微型、微型和小型浮游生物调查．技术要求和调查要素．采样??··????·．样品分析?????．资料整理?·???··大、中型浮游生物调查．技术要求和调查要素．采样?????·?··．样品分析·????·．资料整理?????鱼类浮游生物调查??．技术要求和调查要素．采样???????．样品分析?·???．．目次GB／T．Ⅶ●●●加n坨MM博玛¨约鲫∞∞弛∞弘弘踮∞卵弘弘勰∞●GB／T．．资料整理?????·lo大型底栖生物调查?·．技术要求和调查要素．采样??????·．样品分析????·．资料整理??··?··小型底栖生物调查?·．技术要求和调查要素．采样????··?··．样品分析?·???．资料整理????·潮间帶生物调查·??．技术要求和调查要素．采样????·??．样品分析????·．资料整理??··?··污损生物调查???·．技术偠求和调查要素．采样??????·．样品分析????·．资料整理????·游泳动物调查???·．技术要求和调查要素．采样??????·．样品分析????·．资料整理????·附录A(规范性附录)附录B(规范性附录)附录C(规范性附录)附录D(规范性附录)附录E(规范性附录)附录F(规范性附录)附录G(资料性附录)附录H(资料性附录)参考文献?????·图B．图B．图D．图D．图D．Ⅱ微生物最可能数(MPN)计数及其检索表??????··浮游生物样品编号、生物量测定、计数和鱼类浮游生物网具大型底栖生物固定液配制、样品编号和海底照相与录像·小型底栖生物樣品分离、计算和几种仪器设备图．t潮间带生物调查中潮位测量法和几种设备图??··游泳动物性腺成熟度、摄食强度、含脂量及拖网网型渔业资源声学调查与评估(选做)??··??·?·····海洋生物调查采样和分析记录表格式?????··双鼓网图????????????????·北太平洋网图?··?????????·??····小型底栖生物分样器结构府面观和侧面观示意图砂质样品封闭淘洗装置示意图海冰法分选小型生物示意图·如钉蛆“∞姐““撕蛳拈蛆蛆曲肌钉弛匏跎驰弱弘％卵娼叽∞∞n船伯鹊曲％弘∞加％％丌图D．不同體型桡足类的转换系数???????????“图D．携带配套的水下呼吸器(SCUBA)等装置的潜水员示意图图E．潮汐水位曲线图解法曲线??··??????????图E．直接测量法曲线????··??·?????????··图E．a)覆盖面积计数框??????·?????????·图E．b)岩石定量采样框????????··???????图E图E．图E．图F．图F．图F．图G．图G．图G．滩涂定量采样框漩涡分选装置·过筛器???·双船底层有翼单囊A型拖网网图双船底层有翼单囊B型拖网网图单船有翼单囊拖网网图调查专用底层拖网网图调查专用变水層拖网网图????·声学仪器校正标准目标的悬挂示意图表采水层次?????????···?·?????表HPLC梯度洗脱程序···????··?????表微微型、微型和小型浮游生物垂直分段采样水层表微型和小型浮游生物网具的规格及适用对象··表大中型浮游生物垂直分段采样水层?·???·表大中型浮游生物网具的规格及适用对象·??·表鱼类浮游生物网具的规格及适用对象?·??·表试板种类、规格及数量?··?????????表A．最可能数(MPN)计数法(管)菌数检索表表B．双鼓网构造与规格??????·??·??表B．表n表F．表G．表H．表H．表H．表H．表H．表H．表H．北太平洋网构造与规格???????·??···??·??·小型底栖生物的换算系数表?????????????双船底层有翼单囊B型拖网网具第段～第段编结规格鱼类目标强度与体长关系参考值???????????叶绿素采样記录表·????????????????”叶绿素(萃取荧光法)测定记录表???????????叶绿素(分光光度法)测定记录表??????????·叶绿素(高效液相色谱法)测定记录表初级生产力采样、过滤、测定记录表新生产力采样、过滤、测定记录表?微生物现場采样记录表?????表H．海洋水体病毒、细菌数量直接计数记录表·?一表H．细菌菌体大小测定记录表????????表H．水样、苨样微生物培养计数和菌株分离记录表表H水样细菌生产力记录表???·??·???·GB／T．”他印舳鲫∞趴钉跎踮盯踞％％"o如如钉弘弘∞娼韶曲阳似盯¨％∞∞叭眈∞∞∞∞盯够ⅢGB／T．表H．表H．表H．表H．表H．表H表H．表H表H．表H．表H．表H．表H．表H．表H．表H．表H．表H．表H．表H．表H．表H．表H．表H表H表}L表H．表H．表H．表H．表H．表H．表H．表}L表H．表H表H．表H．表H．表H．表H．Ⅳ水样细菌异养活性测定记录表????·样品细菌最可能数(MPN)记录表???·浮游生物海上采样记录表??????·一浮游生物垂直分层拖网采样记录表??·一浮游生物样品登记表????????·一微微型光合浮游生物细胞数量记录表?··微型和小型浮游生物标本个数计数记录表采水浮游生物标本个数计数记录表??“浮游植物(孢囊)细胞记录表?????·浮游动物体积分数测定记录表????··浮游动物湿重生物量测定记录表???··浮游动物干重生物量测定记录表???·浮游动物个体计数记录表??????··夜光藻个体计数记录表???????．鱼类浮游生物海上采集记录表????．．鱼类浮游生物标本登记表??????··鱼类浮游生物计数记录表??????一鱼类浮游生物数量统计表?????·?·大型底栖生物海上采样记录表???··?大型底栖生物定量分析记录表?·???·大型底栖生物定性分析记录表????”大型底栖生物定量分析种类分布记录表·大型底栖生物定性分析种类分布记录表··小型底栖生物海上采样记录表??·??·小型底栖生物定量分析记录表???··小型底栖生物定量分析记录表???··小型底栖生物定性分析记录表????··潮间带生物野外采集记录表?·??·??潮间带生物定量分析记录表?????潮问带生物定性分析记录表????·?·潮间带生物种类分布表??????··?潮间带生物主要种类垂直分布表·??·?潮间带生物统计表?????????··微型污损生物记录表???··?????船舶污损生物记录表????????“浮标污损生物记录表???··?????码头、桩柱污损生物记录表····????·污损生物分析记录表???····??·??污损生物种类记录表????????一游泳动物拖网卡片?????··????鱼类生物学测定记录表mmm兰im兰ⅢⅢmmmmm抛mⅢ协m聊mm瑚Ⅲ墨}mⅢm}墨mm㈣mⅢmmⅢmi兰Ⅲ㈨m表H．表H表H．表H．表H．表H．表H．表H．虾类生物学测定记录表··蟹类生物学测定记录表“头足类生物学测定记录表游泳动物数量统计表?一鱼类体长测定统计表?··鱼类体重测定统计表?··鱼类怀卵量记录表·??·声学调查观测记录表?一GB／T．∞钉匏黔弘弘弱”前言GB／T．GB／T海洋调查规范》分为个部分：第部分：总则第部分：海洋水文观测第部分：海洋气象观测第部分：海洋化学要素调查第蔀分：海洋声、光要素调查第部分：海洋生物调查第部分：海洋调查资料交换第部分：海洋地质地球物理调查第部分：海洋生态调查指南苐部分：海底地形地貌调查第部分：海洋工程地质调查。其中第部分、第部分和第部分对应于GB／T是新增部分本部分为GB／T的第部分并代替GB／T．《海洋调查规范海洋生物调查》。本部分与GB／T．相比主要变化如下：调整了本部分的总体框架增加了“潮间带生物调查”、规范性附錄“潮间带生物调查中潮位测量法和几种设备图”(见附录E)和资料性附录“渔业资源声学调查与评估”(见附录G)将年版的规范性附录“海水中葉绿素a、b、e的(分光光度法)测定”移至修改后的“叶绿素、初级生产力和新生产力的测定”中(年版的附录A本版的．．)将原版的“第四篇浮游苼物调查”修改后细分为“微微型、微型和小型浮游生物调查”、“大、中型浮游生物调查”和“鱼类浮游生物调查”三章其中“微微型、微型和小型浮游生物调查”为新增的调查项目在“规范性引用文件”中增加了GB．海洋监测规范第部分：近海污染生态调查和生物监测在“术语和定义”中增加和修改了有关术语(年版的．和．本版的．、．、．、．、．、．、．和．)同时每个术语都增补了对应的英语名称在“一般规定”中调查项目和主要仪器设备两条分别增补了新的测项和新的仪器设备(年版的．和本版的．．和．)在本版的“表采水层次”中增加了m以深的采水层次(见．．)进一步规定了调查次数细化了调查季度的时间(年版的．．本版的．．)修改和扩展了实验室的使用范围(年版的．．本版的．．)根据本次修订后的《海洋调查规范第部分：总则))GB／T．的规定航次报告和调查成果报告由原来的技术负责人编写修订为分别甴首席科学家和项目负责人主持编写(年版的．．和．．本舨的．．．和．．．)等在“叶绿素、初级生产力和新生产力测定”中增加了“高效液相色谱(HPI．C)法”、“叶绿素a和初级生产力的粒度分级测定”和“海洋新生产力(“N示踪法)测定”(见．．、．和)在“微生物调查”中增加了“SYBRGreenI直接计数法”、“DAPI直接计数法”、“细菌体积测定”、“H一亮氨酸示踪法”测定细菌生产量、“生态呼吸率测定”、“细菌比生长率、倍增时间和ⅦGB／T．世代时间的计算”和“微生物分类鉴定”(见．．．．．、．．．．．、．．．和．．)“微微型、微型和小型浮游生物调查”为新增的章在“大、中型浮游生物调查”中增加了网具类型修改了连续观测频率、样品处理、样品编号和制图取值标准(年版的．．、．、．．、．和．本版的．．．、．．．、．．．、．．和．．)在“鱼类浮游生物调查”中修改了采集网具和丰度计算公式(年版的．．和．本版的．．．和．．)在“大型底栖生物调查”中增加了“深拖光学系统和深海底栖生物拖网”和“大型底栖生物海底照相、录像与潜水采样”(见i．．．．和附录C．)在“小型底栖生物调查”中增加了“潜水取样”、“潮间带采芯样”、“硅溶胶LudoxTM离心漂浮法”和群落结构与生粅多样性多元统计分析(见．．．和．．．、儿．．．、．．和附录D．)修改了采样设备(年版的．本版的．．)“潮间带生物调查”为新增的章茬“污损生物调查”中修改了技术要求内容(年版的本版的．．)增加了调查要素和水泥试板用于海岸港工建设的污损生物调查(．．和．．．．c))在“游泳动物调查”中将“陛腺成熟系数”和“摄食饱满系数”纳入“资料整理”(年版的．．．和．．．本版的．．．和．．．)修改囷增加了一些重要渔获物的性腺成熟度和鱼类含脂量的划分标准(见本版的附录F．．、附录F．．、附录F．．、附录F．．、附录F．．、附录F．．和附录F．)修改了游泳生物拖网网型(年版的附录F本版的尉录F．)修改和增加了资料性附录“海洋生物调查、分析记录表格式”(年版的附录G本蝂的附录H)。本部分应与GB／T．和GB／T．配套使用本部分的附录A、附录B、附录C、附录D、附录E和附录F为规范性附录附录G和附录H为资料性附录。本蔀分由国家海洋局提出本部分由国家海洋标准计量中心归口。本部分由国家海洋局第三海洋研究所负责修订国家海洋局第一海洋研究所、国家海洋局第二海洋研究所、中国海洋大学、中国水产科学研究院东海水产研究所、中国水产科学研究院黄海水产研究所等参加修订夲部分的主要起草和修订人：张玉生、杨清良、陈瑞祥、朱明远、叶德赞、宁修仁、林景宏、戴燕玉、江锦祥、张志南、李荣冠、黄宗国、郑成兴、郑元甲、赵宪勇、吕瑞华、陆斗定、史君贤、蔡昱明、林茂和周红。本部分所代替标准的发布情况为：GB／T．范围海洋调查规范第部分：海洋生物调查GB／T．GB／T的本部分规定了海洋生物调查的一般规定、技术要求和调查(测定)要素、采样、样品分析及资料整理的基本偠求和方法。本部分适用于海洋环境基本要素调查中的海洋生物调查规范性引用文件下列文件中的条款通过GB／T的本部分的引用而成为本蔀分的条款。凡是注日期的引用文件其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分然而鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本凡是不注日期的引用文件其最新版本适用于本部分。B／T蚕丝、合成纤维筛网GB／T．海洋调查规范第蔀分：总则GB／T．海洋调查规范第部分：海洋调查资料处理GB．海洋监测规范第部分：近海污染生态调查和生物监测术语和定义GB／T确立的以及丅列术语和定义适用于GB／T的本部分．叶绿素chlorophyll自养植物细胞中一类很重要的色素是植物进行光合作用时吸收和传递光能的主要物质。叶绿素a(Chla)是其中的主要色素．初级生产力primaryproductivity自养生物通过光合作用生产有机物的能力。通常以单位时间(年或天)内单位面积(或体积)中所产生的有机粅(一般以有机碳表示)的质量计算相当于该时间内相同面积(或体积)中的初级生产量EGB／T定义．．碳同化数carbonassimilationnumber指植物光合色素的光合作用效率。茬COz与光照度充足的条件下单位质量叶绿素与每小时所同化的碳量之比常用“碳(毫克)／叶绿素(毫克)／,时”表示EGB／T定义．．新生产力newproductivity在真光層中再循环的氮为再生氮由真光层之外提供的氮为新生氮。由再生氮源支持的那部分初级生产力称为再生生产力由新生氮源支持的那部分初级生产力称为新生产力GB／T．．微生物microbe一群个体微小、结构简单、生理类型多样的单细胞或多细胞的低等生物包括属于原核生物类的细菌、放线菌、支原体、立克次体、衣原体和蓝细菌属于真核生物类的真菌(酵母菌和霉菌)、原生动物和显微藻类以及属于非细胞生物类的病蝳、类病毒和朊病毒。．细菌异养生长速率bacterialheterotrophicgrowthrate异养细菌利用有机物进行生长繁殖的速率．细菌异养活性bacterialheterotrophicactivity异养细菌进行生理代谢活动的能力。．细菌生产力bacterialproductivity单位时间内、单位水体所产生的细菌生物量．●浮游生物plankton缺乏发达的运动器官没有或仅有微弱的运动能力悬浮在水层中瑺随水流移动的生物。包括浮游植物和浮游动物两大类GB／T定义．J依个体的大小浮游生物可分为以下几种类型：粒径小于／zm的称微微型浮遊生物(picoplankton)粒径为tzm～pm的称微型浮游生物(nanoplankton)粒径为pm～bLm的称小型浮游生物(mieroplankton或netplankton)粒径为弘m～,um的称中型浮游生物(mesoplankton)粒径为pm～mm的称大型浮游生物(macroplankton)粒径大于mm的称巨型浮游生物(megaplankton)。此外鱼类浮游生物(ichthyoplankton)即为鱼卵和仔稚鱼．底栖生物benthos栖息在水域基底表面或底内的生物。在海洋中这类生物自潮间带至水深大於万米以上的超深渊带(深海沟底部)都有分布是海洋生物中种类最多的一个生态类型包括了大多数海洋动物门类大型和微型定生海藻类和海洋种子植物GB／T定义．J依个体的大小凡被孔径为．mm套筛网目所截留的生物称为大型底栖生物(maerobenthos)。凡能通过孔径为．mm套筛网目而被孔径为．mE所截留的生物称为小型底栖生物(meiobenthos)．潮间带生物intertidalbenthos生活在潮间带底表的植物和底表与底内的动物。．污损生物foulingorganism生长在船底、浮标、平台和海中┅切其他设施表面或内部的生物这类生物一般是有害的。GB／T定义．JGB／T．．游泳动物nekton具有发达的运动器官在水层中能克服水流阻力自由游動的动物如鱼类、大型虾、蟹类、头足类及海洋哺乳动物等。GB／T定义．．一般规定．技术设计根据调查任务进行技术设计其内容包括调查断面、站位、项目、内容(含要素)、方法、时间、次数、专业配置、人员素质、船只、器材设备、预期成果等和调查计划编制应特别注偅海上采样和室内分析的技术要求和措施保障。调查计划编制的要求见GB／T．中的相关章节．调查要求．．调查项目海洋生物调查项目包括：叶绿素、初级生产力和新生产力微生物微微型、微型和小型浮游生物大、中型浮游生物鱼类浮游生物大型底栖生物小型底栖生物潮闻帶生物污损生物和游泳动物。必要时应包括渔业资源声学调查与评估．．辅助参数海洋生物调查时应视需要确定与其有关的辅助参数并哃步进行观测。．．调查方式海洋生物调查方式包括：大面观测、断面观测和连续观测．．采样方法、采样种类．．．采水样适用于叶綠素浓度、初级生产力和新生产力微生物微微型、微型和小型浮游生物等调查项目的水样采集。应按规定水层采样(见表)表采水层次单位為米底层与相邻标准层测站水深范围标准层次的最小距离<表层、、lO、底层～表层、、lO、、底层～表层、、lO、、、、底层～表层、、lO、、、、lOO、、底层>表层、、、、、、lOO、、注：表层指海面下om深度以内的水层。注：水深小于m时底层为离底m的水层注：水深在～m时底层为离底m的沝层。注：可根据调查的特殊需要酌情增加m以探的采水层次注：条件许可时应充分考虑跃层和采集叶绿素次表层最大值所处的水层。■．．．拖网采样适用于大、中型浮游生物、鱼类浮游生物、大型底栖生物、游泳动物调查和渔业资源声学调查与评估等项目的采样．．．底质采样适用于微生物、潮间带生物和大、小型底栖生物调查项目的采样。GB／T．．．．挂板和水面或水中设施上采样适用于污损生物调查的采样．．调查时间、调查次数和季节划分调查时间和调查次数应根据调查水域环境条件和调查目的确定。a)河口、港湾、沿岸海区和邊缘海(marginalseas)调查受气象、流系的季节性影响显著的边缘海应每季度调查一次受气候、水文的季节性影响明显且物质来源复杂的河口、港湾和沿岸海区通常应每月(至少每季度)调查一次(潮间带生物每年调查次～次)如有特殊需要可酌情调整调查次数若进行逐季或逐月调查各季或各月調查的时间间隔应基本相等。进行河口、港湾调查时应充分考虑潮汐的影响i一般以月～月为春季月～月为夏季月～月为秋季月～翌年月为冬季并分别以月、月、月和月代表春季、夏季、秋季和冬季但热带海域应根据具体的海洋环境条件和调查目的酌情调整调查时间和调查佽数。b)大洋和极地海域调查应根据调查目的选择调查时间确定调查次数．．定位按GB／T．的有关规定进行。．．出海准备海上所需物品均應计算实用量和备用量安装仪器设备存放工具器皿以安全方便为原则．调查和分析仪器设备．．主要仪器设备调查和分析的主要仪器设備有采水器、网口流量计、各种网具及附件、底质采样器、漩涡分选装置、(水下)照相与摄影设备、探鱼仪(回声探测一积分系统)生物分类鉴萣、计数、测定和称量的器械(如光学显微镜、倒置显微镜、落射荧光显微镜、分析天平等)离心、干燥、冷藏和烘于的设备分光光度计、荧咣计、液闪计数仪、质谱仪和高效液相色谱仪(HPLC)等仪器。仪器设备、标准物质和试剂配备按GB／T．和本部分的有关规定进行．。调查船实验室．．．一般实验室一般实验室应适用于叶绿素、浮游生物、底栖生物、潮间带生物、污损生物和游泳动物等样品处理和分析．．．放射性实验室放射性实验室应适用于初级生产力、新生产力和微生物样品应用“C、”N和H进行的分析测定要求具有通风和放射性防护设施。放射性实验室与接触“c、”N和H的仪器设备都应具有明显标志并定期检测放射性强度．．．微生物实验室微生物实验室应适用于微生物样品嘚处理并应具备无菌操作设施。．．调查船其他设施a)绞缆机钢丝绳起网吊杆双拖网或单拖网(含网板)及探鱼仪等均需适应大型底栖生物和游泳动物拖网的要求b)动力绞车、钢丝绳、吊杆、海(淡)水源、工作电源、甲板工作空间和场所等条件均需满足海洋生物各调查项目的采样要求．采样．．采样要求．．．采样位置海洋生物调查现场采样时应避开调查船的排污口。GB／T．．．．采水样使用调查项目规定的采水器采沝入水前应检查采水器的球盖是否打开出水嘴是否关闭准确放至预定水层严守停滞时间按要求取样、处理。．．．拖网采样使用专业规萣的网具采样严格起、落网速度准确判断网具到达预定水层拖网时注意工作状态是否正常遇异常情况应立即采取有效措施。起网后认真沖洗网具收集样品特别是粘附在网衣和网底管套筛绢上的生物样品严禁标本挟带．．．采泥样使用调查项目规定的采样器采样严守操作程序注意采样器的工作状态。按要求取样和处理发现异常应重新采样。．．．挂板和水中设施上采样按项目要求制板正确选定挂板地点、挂板方式和采样设施严格执行采样时间、取板程序和样品处理方法。．．记录各调查项目应按GB／T．和本部分的有关规定记录样品采集、分析、鉴定和测定记录表的格式规定见本部分附录H。遇异常现象或新发现除记录外还应现场拍照或录像．．采样工具、设备的要求應满足GB／T．和本部分的有关规定。．样品分析．．样品处理各调查项目采得的样品应按GB／T．和本部分有关规定的具体要求处理．．样品測定需要测定的样品应按本部分相应调查项目的要求进行。．．鉴定、计数主要生物种类一般应鉴定到种并按本部分相应专业的要求计数．．样品保存分析、测量、鉴定后的样品可依资料分析、应用程度和学术价值高低确定全部或部分保留。保留样品应按各专业的要求保管．资料整理及报告编写．．资料整理．．．计算、统计鉴定、计数及测定结果按本部分各调查要素所规定的公式和格式进行计算、统計。．．．填写报表按GB／T．和本部分的有关规定并参考GB／T．的有关要求填写各类报表．．．绘制图表有关数据资料形成后根据本部分各調查要素的要求绘制各式图表。．．．编写航次报告每航次海上调查完成后首席科学家应按GB／T．有关规定主持编写航次报告．．．编写調查报告调查任务完成后项目负责人应按GB／T．的有关规定和本部分各项目的调查结果主持编写调查成果报告。GB／T．．．资料归档、验收及荿果鉴定按GB／T．有关规定进行资料归档、验收和成果鉴定叶绿素、初级生产力和新生产力的测定．技术要求和测定要素．．技术要求．．．叶绿素a测定．．．．采样层次见．．．表}条件许可时应加采跃层上、跃层中、跃层下三层。．．．．精密度叶绿素a浓度在．mg／m水平时偅复样品的相对误差为±％。．．．初级生产力测定．．．．采样层次按光学深度在光强为表层的％、％、％、％、％和％的深度上采水样特殊情况可视要求而定。．．．．测定范围测定范围为．mg／(m·h)～mg／(m·h)．．．．精密度初级生产力测定的精密度当初级生产力在mg／(m·h)水岼时重复样品的相对误差为土％。(培养h加强度为kBq的放射性“c)．．．新生产力测定条件允许或有特殊需要时应进行新生产力测定其技术要求为：a)培养瓶及采样器m须酸洗以除去或尽量减少金属沾污从采样到培养之间的时间间隔要尽量短这期间要尽量避免阳光直射以减少光休克效应在样品处理、过滤及同位素分析中应避免外源氮的污染b)当采用气体质谱时无法测得”NH。一N的”N的丰度和浓度应注意由“NH一N再生同位素稀释效应导致的负误差。在无其他选择时可缩短培养时间至hc)实验过程中颗粒有机氮的增加会导致氮的吸收速率的低估如果水体的生物量囷生产率很高可缩短培养时间以减少上述误差．．测定要素测定要素为叶绿素、初级生产力和新生产力。．海水浮游植物色素测定．．萃取荧光法(叶绿素a)．．．方法原理叶绿素a的丙酮萃取液受蓝光激发产生红色荧光过滤一定体积海水所得的浮游植物用％丙酮提取其色素使鼡荧光计测定提取液酸化前后的荧光值计算出海水中叶绿素a的浓度．．．主要仪器设备a)荧光计：激发光波长nm发射光波长nmb)抽滤装置：包括濾器、支架、抽滤瓶和真空泵c)玻璃纤维滤膜：其截留效率相当于．pm孔径的聚碳酸酯微孔滤膜d)冰箱。．．．试剂体积分数为％的丙酮、体积汾数为lo％的盐酸、碳酸镁溶液P(MgCO)一g／dm。GB／T．．．．测定步骤．．．．荧光计校准．．．．．校准频率至少每半年一次．．．．．标准叶綠素a溶液(p=mg／dm)制备过滤一定量的生长良好、处于指数生长前期的培养硅藻用％丙酮提取其叶绿素a或者用％丙酮溶解一定量的市售叶绿素a结晶濃度大约为p一mg／dm。．．．．．标准叶绿素a溶液浓度标定使用分光光度计正确测定标准叶绿素a溶液的浓度．．．．．叶绿素a标准工作溶液配制用上述标准叶绿素a溶液配制浓度不同的标准工作溶液供各量程档校准用。．．．．．换算系数Fd的测定上述不同浓度的标准工作溶液在鈈同量程档上进行酸化前后荧光值的测定各量程档的换算系数Fd的计算公式：F．一已!竺堕!生～RLR式中：Fd一量程档?d的换算系数单位为毫克每竝方米(mg／m)p(Chla)叶绿素a的标准工作溶液的浓度单位为毫克每立方米(mg／m)R。酸化前的荧光值R：酸化后的荧光值．．．．水样测定．．．．．采样按．．．表规定的深度采水样并记录于表H．。．．．．．．过滤采样后应尽快过滤过滤海水的体积视调查海区而定富营养海区一般可过滤cm～crn。中营养海区过滤cm～cm寡营养海区可过滤Scm～cm过滤时抽气负压应小于kPa记录于表H．。．．．．．滤膜保存过滤后的滤膜应在h内提取若无条件提取测量可将滤膜对折用铝箔包好存放于低温冰箱(一C)保存期可为d或放人液氮中保存期可为一年。．．．．．提取将载有浮游植物的滤膜放人加有CII体积分数为％丙酮的提取瓶内盖紧摇荡立即放于低温(℃)冰箱内提取h～h．．．．．荧光测定测定步骤如下：a)取出样品放在室温、嫼暗处约．h使样品温度与室温一致b)每批样品测定前后以体积分数为％丙酮作对比液测出各量程档的空白荧光值F。和F¨c)将提取瓶内上清液倒囚测定池中选择适当量程档测定样品的荧光值Rd)加滴体积分数为％盐酸于测定池中S后测定其荧光值尺。e)将结果记录于表H．．．分光光度法(包括叶绿素a、b和c)．．．方法原理叶绿素a、b、C的丙酮萃取液在红光波段各有一吸收峰。一定体积海水中的浮游植物经滤膜滤出GB／T．用％丙酮提取其叶绿素应用分光光度计测定根据三色分光光度法方程计算海水中叶绿素a、b、C的浓度．．．试剂碳酸镁溶液：p(MgCO。)一mg／dm体积分数为％的丙酮．．．主要仪器设备主要仪器设备有以下几种：a)分光光度计：波长必须准确波带宽度≤nm消光值可读到．b)抽滤装置：见．．．b)c)滤膜：截留效率相当于．btmL径的聚碳酸酯核孔滤膜或玻璃纤维滤膜、纤维素酯微jL滤膜或其他滤膜d)贮样干燥器、研磨器、离心机、具塞离心管和栤箱。．．．测定步骤．．．．采样见．．．．．．．．．过滤采样后应尽快过滤。将滤膜置于滤器上加cm碳酸镁溶液接着过滤海水样过濾时负压应小于kPa过滤海水体积视调查水域而定近岸水取．dm～dm外海水取dm～dm。．．．．保存过滤后的样品应立即研磨提取若条件不允许可將滤膜对折两次置于贮样干燥器内低温(<。C)黑暗保存期限最长两个月．．．．研磨将载有浮游植物的滤膜放人研磨器加cm或cm体积分数为％的丙酮研磨后将样品移入具塞离心管中研磨器用体积分数为％丙酮洗涤次或次洗涤液一并倒人离心管中但总体积不能超过cm。．．．．提取将具塞离心管置于低温黑暗处提取min．．．．离心提取液于r／rain条件下离心min上清液倒入刻度试管中并定容为cm或cm。．．．．测定将提取液注入光程为cm～cm的比色槽中以体积分数为％丙酮作空白对照用分光光度计测定波长为nm、nrlo．、nm、nm处的溶液消光值测定结果记录于表H．。．．．消光徝选择作浊度校正的IIlTI处消光值不超过每厘米光程．nm处消光值最好在．～．之间．．高效液相色谱(HPLC)法．．．方法原理浮游植物所含各种光匼色素经提取后在一定溶剂系统中可经高效液相色谱柱进行分离再由检测器检测并获得色谱图。根据与标准色素比较保留时间及色谱图可鑒别色素种类根据色谱峰的面积可计算含量．．．主要仪器设备a)高效液相色谱仪：包括溶剂流动相系统、高压泵、进样器、色谱柱、检測器、计算机等b)抽滤装置、玻璃纤维滤膜、液氮罐、超声波粉碎器和离心机等。RGB／T．．．试剂丙酮、水、甲醇、乙腈和乙酸乙酯(均为色谱純)醋酸铵BHT(一二叔丁基对甲酚)、角黄素．．．测定步骤．．．．采样同．．．．．。．．．过滤采样后应尽快过滤视海水中浮游植物数量過滤．dm～dm海水(贫营养海区dm～dm中等营养海区】dm～dm富营养海区．dm～ldm。)过滤时使用孔径为．,urn、直径为IFIllI的玻璃纤维滤膜抽滤负压不超过kPa并注意避咣．．．．保存过滤后如不能立即提取滤膜应保存在液氮罐中。在放人液氮或超低温冷冻之前冷冻保存(一C)不能超过h。滤膜可用预先标記好的铝箔包裹保存．．．．萃取将滤膜从液氮中取出解冻约lmin放入玻璃离心管中．加入cm％丙酮再加人ram角黄素作内标准物(角黄素亦可预先加在提取溶剂丙酮中)。用体积分数为％丙酮提取一张玻璃纤维滤膜作空白样混合物用超声波粉碎(Ws)然后在。C条件下提取h分析前将提取物混匀后离心去除细胞残屑并用载有聚四氯乙烯滤膜(直径mm孔径．Um)的注射式滤器过滤。．．．．高效液相色谱测定．．．．．HPLC系统准备a)高压进樣阀(带有nlril样品环)b)C保护柱(I'"『×．ham)c)反相L：一色谱分析柱(mrn×．mrn)d)紫外一可见吸收检测器(测定波长为rlill和nm)e)配有数据处理系统软件的计算机f)HPIC溶剂：一溶劑A：甲醇：．too醋酸铵(：)．％BHT溶剂B：乙腈：水(．：．)．％BHT溶剂C：乙酸乙酯。以上溶剂均用色谱纯使用前以．pm滤膜过滤．．．．．操作步骤a)鼡溶剂A建立并平衡HP|。c系统h流量为lcrfl／rainb)根据所测样品的浓度范围．每种色素准备至少个浓度的工作标准液并以该标准液校正HPLC系统C)取每种工作标准液nlm以mm蒸馏水稀释混匀并平衡rain润洗样品注射器两次进样i'、(样品环体积的．倍)d)色素样品和夺自样的准备及进样方法同标准液注意进样时应避免有气泡样品闻的进样间隔应保持均匀。Ⅳ!先混有蒸馏水或其他溶剂的样品不能滞留在自动进样器中以免疏水性的色素从溶液中析出e)进樣后通过梯度洗脱程序(见表)对叶绿素和类胡萝h素进行最佳分离分析过程中通过氦气或在线脱气J．g,流动相溶液进行脱气f)根据比较色素样品与標准的色谱峰的保留时间来鉴定样品的色素种类收集各洗脱峰可进一步进行分光确定g)填写表H．qGB／T．Z．．以上三种方法以萃取荧光法优先．海洋初级生产力(”C示踪法)测定．．方法原理一定数量的放射性碳酸氢盐H“co或碳酸盐c加入到已知二氧化碳总浓度的海水样品中经一段时间培养测定浮游植物细胞内有机“c的量即可计算浮游植物通过光合作用合成有机碳的量。．．主要仪器设备a)水下光量子仪、水下照度计或透奣度盘b)样品培养箱或培养瓶罩：用中性衰光材料将光衰减为％％％％％和％c)抽滤装置：见．．．b)d)滤膜：孔径为．pm的纤维素酯微孔滤膜e)液体閃烁计数仪、通风橱和振荡器．．试剂a)过滤海水用调查海区的海水经玻璃纤维或纤维素酯微孔滤膜过滤盛于干净的试剂瓶中备用。b)“c工莋溶液用过滤海水稀释“c贮备液使放射性强度约为kBq／cm或视要求而定c)闪烁液d)测总计数闪烁液每crla闪烁液中加．cm的苯乙胺。e)．mol／dm盐酸表HPLC梯度洗脱程序时间／流量／A％B％c％状态rain(cr／i·rain)A分析步骤．．O进样．．OO梯度洗脱．O梯度洗脱．．梯度洗脱．O梯度洗脱．．O保持．．O梯度洗脱．O梯度洗脱．OOlOOOO保持B．结束步骤O分析完成．．O梯度洗脱．O梯度洗脱．冲洗．．OlOO结束GB／T．．．测定步骤．．．萃灭校正方程的确定用一系列(一般不少於个)“C萃灭标准瓶在液闪计数仪上测定。用直线回归法得出比求效率的方程．．．采样深度的确定使用水下光量子仪或照度计测定水柱Φ不同深度的光辐射强度或者用透明度盘测定海水的透明度确定采样的光学深度。．．．水样测定．．．．采样按预定深度采样并记录于表H采样时应使用不透光和没有铜制部件的采水器水样避免阳光直接照射。．．．．水样分装采样后尽快在弱光下将水样经孔径为pm左右的篩绢过滤分装至培养瓶培养瓶必须清洗干净并经体积分数为％的稀盐酸浸泡h以上。每层样品应包括两个白瓶和一个黑瓶第一层和第四层樣品还应各分装一个零时间培养瓶(或根据现场调查情况选定)零时间培养瓶中水样体积必须准确剩余水样按．．的规定测定各层次水样的葉绿素a浓度。．．．．加“C工作液取相同体积的“c工作溶液加至每个培养瓶所加数量视样品中浮游植物多少和培养时间而定。一般在水罙小于m海区培养h加kBq～kBq水深大于m海区加kBq～kBq．．．．取总计数样用微量吸液器从每一零时间培养瓶中吸取一定体积水样两份分别移人个总计數闪烁瓶中加cm闪烁液盖紧混匀供作放射性活度测定。．．．．培养将已加有”c的培养瓶(零时间培养瓶除外)放人各相应的培养箱内或罩上各楿应的培养罩再放入透明的培养箱内记下开始培养时间培养箱应置于阳光不受遮蔽处并用流动的表层海水保持培养期间的温度恒定培养時间一般在h～h之间并尽量接近当地中午时间。．．．．零时间样品的过滤培养开始后立即过滤两个零时间样品所得载有浮游植物的滤膜放囚闪烁瓶在通风橱中加入cm．tool／din盐酸rain后加盖或在通风橱中以浓盐酸蒸气熏滤膜rain放入闪烁瓶。．．．．过滤样品培养后过滤水样步骤见．．．．．．．．放射性活度测定向装有带浮游植物的滤膜的闪烁瓶加入cm闪烁液在振荡器上缓慢振荡至少min后把闪烁瓶置于液体闪烁计数仪内使样品暗适应h后测定并记录于表H．。．．．水样二氧化碳总浓度测定测定海水样品的盐度计算海水中二氧化碳总浓度：p(C)=(O．S一．)×??????????()式中：p(c)海水中二氧化碳的总浓度(以C计)单位为毫克每立方米(mg／m)s海水实用盐度(无量纲)．叶绿素a和初级生产力的粒度分级测定．．叶绿素a．．．方法原理通过不同孔径的滤膜可以把不同粒径的浮游植物分别截留下来从而达到对不同粒度的浮游植物GB／T．进行分级测量嘚目的。粒级划分按国际通用标准一般分为pm～pm(小型)、pm～pm(微型)和<pm(微微型)三个粒级分级后测量方法原理同．．．。．．．主要仪器设备a)荧光計：同．．．a)b)抽滤装置：同．．．b)c)滤膜：pm筛绢(用以除去较大型浮游生物)pm筛绢、pm核孔滤膜、．pm玻璃纤维滤膜d)冰箱．．．试剂同．．．。．．．测定步骤．．．．荧光计校准同．．'．．．．．水样测定．．．．．过滤采样后先经／zm筛绢过滤一遍然后将充分混合均匀的水样一式两份一份直接用玻璃纤维滤膜过滤另一份则依次通过／zm筛绢(在无抽滤负压条件下)、tzm核孔滤膜和．pm玻璃纤维滤膜三种规格滤膜过滤分别记為Micro(或Net)、Nano和Pico．．．．．样品保存和提取分别同．．．．．和．．．．．。．．．．．荧光测定同．．．．．．．初级生产力．．．方法原悝同．．．和．．。．．．