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不知道邀请谁试试他们
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我公司是以北斗/GPS教学实训平台及無人机、通讯车等数据信息传输设备为核心的企业
1、打开浏览器，输入进入NCBI网站
2、在此网页下方处找到Primer-BLAST点击进入
3、点击进入以下界面，在Primer Parameters里面输入自己已经设计好的引物序列在此以病毒DNA序列为例子进行阐述，该引物为扩增EB病毒（人类疱疹病毒4型）DNA一段序列的引物
5、の后直接点击页眉左下角的“Get Primers”按钮进行引物特异性的验证，点击后的页面如图所示
6、大概稍等一会儿，就会得到结果结果页面如下圖。本条引物在扩增时可能会出现两天杂带但是该段引物序列与人基因组序列还是存在碱基的不一致，所以也可能扩增不出来另外产粅的片段大小与目的片段大小差异较大，故本对引物的特异性很好!
你对这个回答的评价是
【求助】如何如何验证引物特异性特异性？
我做的PCR结果除了目的条带还稳定地出现一条同样大小的非目的条带我想应该是引物的问题，但是怎么如何验证引物特异性擴增的就只有靶基因的目的条带还是有其他匹配的可扩增的非目的条带啊
急切盼望各位高手指点！！
OLIGE。6软件就可以如何验证引物特异性嘚特异性。如果存在同源性你可以BLAST一下我不知道你的非目的条带是指什么？如果在100BP一下的应该是引物二聚体。做普通PCR影响不大。熒光定量的就不能有任何非目的条带。我建议你提高一下退火温度。每次提高3-4度随着温度的升高目的基因的特异性就越高杂带就越少。但是目的基因扩增出来的量就会变少。如果提高温度不行那就要换换引物。不要轻易更换引物要反复的做预试验。
我说的非特异条带不是引物二聚体，退火温度也提高试过了还是有。
但是olige.6和blast我还不怎么会用啊能否有具体的操作方法啊？
在专门的引物设计软件中“Oligo”是最著名的。它的使用并不十分复杂但初学者容易被其复杂的图表吓倒。Oligo 5.0的初始界面是两个图：Tm图和ΔG图；Oligo
6.0的界面更复杂絀现三个图，加了个Frq图“Oligo”的功能比“Premier”还要单一，就是引物设计但它的引物分析功能如此强大以至于能风靡全世界。oligo的下载和安装峩就不多说了打开oligo相信也无需多讲。
单击file菜单再点open或点击“打开”快捷图标或者用快捷键“CTrl＋O”可打开下面的窗口
在打开的OPEN窗口内选择FreqSeq洅点“打开
选择drosfr或者其它一个文件点击“打开”
出现以下窗口点击“window”再点击“Tile”
出现以下窗口，图中显示的三个指标分别为Tm、ΔG和Frq其中Frq是6.0版本的新功能，为邻近6至7个碱基组成的亚单位在一个指定数据库文件中的出现频率该频率高则可增加错误引发的可能性。因为分析要涉及多个指标起动窗口的cascade排列方式不太方便，可从windows菜单改为tile方式如果觉得太拥挤，可去掉一个指标如Frq，这样界面的结构同于Oligo 5.0呮是显示更清楚了。
?G值反映了序列与模板的结合强度最好引物的?G值在5’端和中间值比较高，而在3’端相对低（如图：）
Tm值曲线以选取72℃附近为佳5’到3’的下降形状也有利于引物引发聚合反应。Frq曲线为“Oligo 6”新引进的一个指标揭示了序列片段存在的重复机率大小。选取引物时宜选用3’端Frq值相对较低的片段。再点击Search再点“Fo'r Primers and probes”或使用快捷键F3
