代谢组学数据挖掘及分析操作SOP-_中华文本库
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代谢组学数据分析操作SOP
应用Masslynx的离线软件进行色谱峰自动识别，峰匹配（峰对齐）和归一化处理，生成biomarkers；(需较长时间,最好在台式电脑上操作比较快)
1) 将生成的biomarkers导入simca-p12.0进行PCA分析，如果分的好采用此种方式，如果分的不好可进行剔除圈外点后进行PLS-DA分析，且进一步剔除圈外点（注：不是所有在圈外的点都应该剔除，选择性剔除较远点后，有的较近的点会自然落在圈内）；
2) Simca-p比较适合两组间的比较，所以组数不要太多，且分的组数比每组的样本数还多是绝对不允许的；
3) 在PCA或者PLS-DA生成的scores图中可以看到各组间聚集效果，可以设置相应参数。在loading图中可以生成vip值列表，挑选VIP&1的化合物进行下一步分析，如果太多可以选择峰面积比值在2以上的标志物为主要标志进行下一步分析；
4) 对simca-p进行的两两比较的组，同样进行t-test检验，P&0.05表示有显著性差异；同时满足以上两点的化合物可作为第1轮的标志物；
5) 在masslynx软件中，选择QC
样本的色谱峰，对以上标志物进行峰提取，点击该图标
输入分子量，按住鼠标右键,拖拉出平均分子量（我们会发现平均分子量对应的出峰时间与masslynx处理数据后的出峰时间不一样，后者是所有样品在该点出峰的平均出峰时间，而前者是输入该分子量后提出来的平均时间，因此不同，但一般在0.05的范围内偏差是可以接受的。）
7） 找出提取的峰为该时间点上最强峰的离子峰（如果有二倍体峰[2(M+1)-1]，更有说服力），定为标志物，否则直接舍弃，可能是碎片峰或者基线波动。所有的分子量都应该提取平均的
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专利名称一种色谱-质谱代谢组学数据分析的新方法
技术领域本发明涉及一种色谱-质谱代谢组学数据分析方法，属于分析化学技术领域。
背景技术代谢组学是系统生物学领域的新兴技术，色谱-质谱联用(如气质联用GC-MSjf质联用LC-MS等)是代谢组学研究中的主流分析技术。色谱-质谱联用仪器往往产生大量数据，如何对这些数据进行有效分析，从而获得有关研究对象的代谢轮廓特征，是目前该领域研究中的关键技术和瓶颈问题。目前，研究色谱-质谱代谢组学数据的常用策略是以保留时间Rt-质荷比m/z处的质谱碎片峰强度为变量，先对质谱碎片峰进行检测、对齐，然后将处理后的信息进行统计学分析。但是，这种数据分析策略存在下列问题(I)采用该策略，每个样品可产生多达上 千个变量(质谱碎片峰的强度)，而代谢组学研究中样品数一般为几十个，由此将导致变量数与样品数比例失衡，为后续分析带来问题；(2)该策略关注质谱峰信息，而质谱峰除包括碎片离子峰外，还包括加合峰、同位素峰等，因此上述大量变量中存在约90 %的冗余信息；而且，变量一般为在某质荷比及保留时间处记录的强度信息，以上均使得后期对差异性代谢物的定性鉴别变得复杂；(3)由于代谢组学研究中内源性代谢物的种类众多，含量不等，有时可能出现色谱峰重叠、变形等现象，从而为数据处理过程带来误差，并影响后续统计分析结果的可靠性。为克服核磁共振代谢组学分析中差异性代谢物定性鉴别困难的问题，瑞士学者提出一种新型的代谢组学数据分析方法——代谢物投影技术(MetaboliteProjection Analysis, MPA) (F. Dieterle, A. Ross, G. Schlottebeck, H. Senn. Anal.Chem. 78(61)。他们首先收集多种代谢物的核磁共振波谱，然后将这些代谢物的波谱投影至由样品建立的统计分析模型，从而可对差异性代谢物直接进行定性鉴别。但是，MPA方法是针对核磁共振数据而建立的，其必要条件是得到代谢物的核磁共振波谱信息；而生物样本一般包含成百上千种代谢物，因此要收集如此多代谢产物的光谱信息是很难做到的。作为代谢组学研究中的主流分析技术，色谱-质谱数据中本身就包含了各个代谢物的质谱信息。因此，本发明对MPA方法进行了改进和扩充，建立了一种研究色谱-质谱代谢组学数据的新策略，并可有效地解决现有色谱-质谱代谢组学数据分析策略中存在的问题。
本发明所要解决的技术问题是建立了一种色谱-质谱代谢组学数据分析的新方法。该方法克服了背景技术的缺点，无需像背景技术那样预先收集代谢物的波谱信息，即可简便地进行数据分析，并对特异性代谢物进行筛选和鉴定。本发明提供了一种色谱-质谱代谢组学数据分析的方法，包含以下步骤(I)代谢物峰的识别
首先从研究体系(包括正常组、模型组、给药组)的各个样品中取出相同体积(如20微升)，混合后建立质控(QC)样品；取QC样品的总离子流色谱(TIC)数据，选取其中信噪比大于3的色谱峰(记为peak_i)，采用化学计量学方法对peak_i进行纯度检测对于纯色谱峰，记录每个色谱峰的左(记为Lpeak i)、右边界(记为Rpeak i)及峰值处(记为Apeak
i)的保留时间；对于经纯度检验判定为重叠的色谱峰，采用化学计量学方法进行解析，获得重叠色谱峰中包含的纯色谱与纯质谱信息；(2)代谢物纯质谱库的建立基于QC样品的色谱-质谱数据，对于每个色谱峰peak_i，将其在Lpeak i和Rpeak i保留时间范围内的所有质谱数据进行加 和、平均，以获得可表征色谱峰peak_i对应代谢物的质谱信息；对于重叠色谱峰，采用化学计量学方法解析得到的纯质谱可直接作为表征重叠色谱峰所包含代谢物的质谱信息；将上述二部分质谱信息合并，即可得到QC样品中所包含的代谢物的纯质谱库(记为XmJ 3^里包含了研究体系中所有样品的代谢物的纯质谱信息；(3)统计分析模型的建立对于研究体系中的每个样品，将其在每个质荷比(m/z)处记录得到的色谱数据进行加和，以得到其总质谱；将所有样品的总质谱对齐，然后合并得到研究体系中各个样品的总质谱数据Xmxn，其中m为样品数，η为质谱通道数；对Xmxn进行主成分分析(PCA)或偏最小二乘-判别分析(PLS-DA)，建立统计分析模型，得到Xmxn的得分⑴和载荷⑵矩阵；对得分T矩阵的前二列绘图，即可观察得出研究体系中样品的分类情况；(4)代谢物投影分析按照下列公式，将XMet投影至上述统计分析模型中的载荷矩阵P，即可得到Xsfet的得分矩阵Tsfet TMet = XMetP将TMet矩阵的前二列绘图，则图上每个点表征一个代谢物，Tsfet图中远离原点的代谢物即为差异性的代谢物，且其与T矩阵前二列绘图中各组样品的方向一致；根据Tsfet图上差异性代谢物的编号，可检索Xsfet得出相应的质谱信息，最后通过检索质谱数据库即可对差异性代谢物进行定性鉴别。优选地，上述方法中用于纯度检测的化学计量学方法可独立选自直观推导式演进特征投影法、渐进因子分析、主成分分析、导数法或正交投影法。更优选地，纯度检测的化学计量学方法为直观推导式演进特征投影法。优选地，上述方法中所述的重叠色谱峰的化学计量学解析方法可独立选自直观推导式演进特征投影法、断层扫描分析法、窗口因子分析法、正交投影法或多元曲线分辨法。更优选地，重叠色谱峰的化学计量学解析方法为直观推导式演进特征投影法。本发明提供的方法具有以下积极效果I、建立了一种可对色谱-质谱代谢组学数据进行分析的新方法；2、采用本发明提出的代谢组学数据分析方法，可方便地筛选差异性代谢物并可直接进行定性鉴别；3、本发明提出的方法不仅可以有效识别现有方法发现的差异性代谢物，而且还可以发现现有方法无法发现的一些差异性代谢物。
图I为在心肌缺血大鼠血浆的代谢组学研究中，由各个样品的总质谱数据建立的PLS-DA模型中的得分图。 -心肌缺血组；■-阳性药组。图2为采用本方法得出的得分矩阵Tsfet图，每个点代表一个代谢物，下图为上图红框中部分的放大图。
具体实施例方式下面根据附图和实施例详细说明本发明的技术方案，并阐明本发明的积极效果，但是不构成对本发明的限制。实施例心肌缺血(Myocardial ischemia, Ml)大鼠血衆的代谢组学研究。动物实验SD雄性大鼠随机分为3组，每组6只A.假手术组；B. MI组；C.阳性药组。灌胃给药，A、B组给予溶媒，C组给予硝酸异山梨酯(5mg/kg/d)，连续5天。最后一天给药后建立心肌缺血模型SD大鼠麻醉后，在第三、四肋间隙，沿胸骨左缘Icm处，剪开胸壁肌肉暴露胸腔，剪开心包膜，暴露心脏，在肺动脉圆锥与左心耳下缘之间，用5-0缝合线结扎冠状动脉左前降支(假手术组省略此步骤)，立即将心脏放回，排挤出胸腔空气，用止血钳闭合胸腔，缝合伤口。术后5小时，腹腔麻醉动物后股动脉取血lmL，分离血浆备用。血浆衍生化步骤由于血浆内代谢物基本无挥发性，因此必须进行衍生化处理，方法为取大鼠血浆100 μ L，加入900 μ L甲醇，涡旋混合、超声提取后，高速离心取上清于玻璃离心管中，以氮气吹干。加入75 μ L甲氧胺吡啶溶液(15mg/mL)，涡旋混合，70°C反应lh，再加入180 μ L衍生化试剂(MSTFA
I)，70°C反应lh，然后转移至离心管中，离心分离后取上清进行GC-MS分析。实验仪器采用赛默飞世尔公司生产的气相色谱-质谱联用仪(Trace UltraGC-DSQ II系统)，色谱柱TR-5MS毛细管柱(30mX O. 25mmX O. 25 μ m)，载气氦气，燃气
氢气，助燃气空气。气相色谱条件进样口温度270°C，初始温度70°C并保持lOmin，然后以10°C /min的速率升至280°C，然后保持IO质谱条件EI离子源温度为260°C，全扫描模式(50 600m/z，每秒扫描5次)，质谱定性鉴别采用NIST质谱库。将仪器提供的色谱_质谱数据转换为Excel格式以进行下面数据分析(I)代谢物峰的识别 基于本研究体系的QC样品的TIC数据，共检测得到信噪比大于3的色谱峰93个，其中5个为采用HELP方法对重叠色谱峰进行解析而得出的代谢物；对于纯色谱峰保存其Lpeak i& Rpeakj及Apeak i的保留时间，对于重叠色谱峰保存经HELP解析得出的纯质谱信息；(2)代谢物纯质谱库的建立基于QC样品的色谱-质谱数据，对于每个纯色谱峰peak_i，将其在Lpeak i和Rpeaki保留时间范围内的所有质谱数据进行加和、平均，以获得可表征色谱峰peak_i对应代谢物的质谱信息，再将该信息与HELP方法解析出的纯质谱合并，即可得到QC样品中包含的代谢物的质谱库(XmJ ;(3)统计分析模型的建立对于MI组及阳性药组的每个样品，将其在每个质荷比(m/z)处记录得到的色谱数据进行加和，以得到其总质谱。将每个样品的总质谱对齐，从而得到研究体系中各个样品的总质谱数据Xmxn，其中Π1为样品数，η为质谱通道数；对Xmxn建立PLS-DA统计分析模型，获得Xmxn的得分(T)和载荷(P)矩阵；对得分T矩阵的前二列绘图(见图I)，可见MI组及阳性药组可明显区分；(4)代谢物投影分析按照公式TMet = XMetP，将XMet投影至上述PLS-DA模型，即可得到代谢物投影得分矩阵T将Tsfet矩阵的前二列绘图(见图2)，图上每个点表征一个代谢物，远离原点的代谢物对样品的分类贡献较大，且其与图I中样品的方向一致；将远离原点的代谢物的质谱输入NIST库进行检索，可直接得出差异性代谢物的定性鉴别信息。表I为采用本发明提出的色谱-质谱代谢组学数据分析新方法以及目前常用的代谢组学数据分析软件一XCMS，对本研究体系进行分析后得出的差异性代谢物的比较。表I本发明提出的方法与XCMS揭示的差异性代谢物的比较*
1.一种色谱-质谱代谢组学数据分析的方法，包含以下步骤
(1)代谢物峰的识别
首先从研究体系(包括正常组、模型组、给药组)的各个样品中取出相同体积，混合后建立质控(QC)样品；取％样品的总离子流色谱(TIC)数据，选取其中信噪比大于3的色谱峰(记为peak_i)，采用化学计量学方法对peak_i进行纯度检测对于纯色谱峰，记录每个色谱峰的左(记为Lpeak i)、右边界(记为Rpeak i)及峰值处(记为Apeak i)的保留时间；对于经纯度检验判定为重叠的色谱峰，采用化学计量学方法进行解析，获得重叠色谱峰中包含的纯色谱与纯质谱信息；
(2)代谢物纯质谱库的建立
基于QC样品的色谱-质谱数据，对于每个色谱峰peak_i，将其在Lpeak」和Rpak」保留时间范围内的所有质谱数据进行加和、平均，以获得可表征色谱峰peak_i对应代谢物的质谱信息；对于重叠色谱峰，采用化学计量学方法解析得到的纯质谱可直接作为表征重叠色谱峰所包含代谢物的质谱信息；将上述二部分质谱信息合并，即可得到QC样品中所包含的代谢物的纯质谱库(记为XMrt) ;XMrt里包含了研究体系中所有样品的代谢物的纯质谱信息；
(3)统计分析模型的建立
对于研究体系中的每个样品，将其在每个质荷比(m/z)处记录得到的色谱数据进行加和，以得到其总质谱；将所有样品的总质谱对齐，然后合并得到研究体系中各个样品的总质谱数据Xmxn，其中m为样品数，η为质谱通道数StXmxn进行主成分分析(PCA)或偏最小二乘-判别分析(PLS-DA)，建立统计分析模型，得到Xmxn的得分⑴和载荷⑵矩阵；
(4)代谢物投影分析
按照下列公式，将Xsfet投影至上述统计分析模型中的载荷矩阵P，即可得到Xsfet的得分矩阵Tsfet ^Met ^MetP
将Tsfet矩阵的前二列绘图，则图上每个点表征一个代谢物，Tsfet图中远离原点的代谢物即为差异性的代谢物；根据Tsfet图上差异性代谢物的编号，可检索Xsfet得出相应的质谱信息，最后通过检索质谱数据库即可对差异性代谢物进行定性鉴别。
2.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述的用于纯度检测的化学计量学方法可独立选自直观推导式演进特征投影法、渐进因子分析、主成分分析、导数法或正交投影法。
3.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述的重叠色谱峰的化学计量学解析方法可独立选自直观推导式演进特征投影法、断层扫描分析法、窗口因子分析法、正交投影法或多元曲线分辨法。
本发明为一种色谱-质谱代谢组学数据分析的新方法，属于分析化学技术领域。该方法基于色谱-质谱数据特征，通过建立代谢物的质谱库XMet，然后将XMet投影至由研究体系中各个样品建立的统计分析模型，从而可得到代谢物投影得分矩阵TMet，将TMet的前二列绘图即可得出差异性的代谢物，并通过检索XMet及质谱数据库即可对差异性代谢物进行定性鉴别。该方法在原有方法的基础上，建立了一种可对色谱-质谱代谢数据进行分析的新方法，从而可方便地筛选差异性代谢物并可直接进行定性鉴别，从而有效地解决现有色谱-质谱代谢组学数据分析策略中存在的问题。
文档编号G01N30/02GKSQ
公开日日 申请日期日 优先权日日
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朱泾中心小学2004学年度第二学期一年级数学期中考查卷 （40分钟完成）
一、计算部分 1、口算 38-3=44+30=29+5=85-7= 52+15=86-50=66+26= 7+70= 8+7=54-3=36-24= 99-9= 4+...
新桥中心学陶研陶活动简报 2007年第12期 本文由【中文word文档库】 搜集整理。中文word文档库免费提供海量教学资料、行业资料、范文模板、应用文书...
石壁中心校学年度第二学期五年级英语测试听力部分 Listen and choose the words.听录音，选单词。（10分） （ ）1.A.garden B.canteen ( ) 2.A. first B.floor ( ) 3.A.playground B...
朱泾中心小学二四学年度第一学期一年级语文测试卷 （完卷时间：40分钟） 读读拼音、写写笔画或部首 （8%） 1、 h&ng piě 2、w& gōu 3、h&ng zh& t& 4、sh& zh& zh& gōu
5、t& shǒu ...
2010学年度北蔡镇中心小学优秀个人/集体名单 年级 优秀儿童团长 6 优秀绿苗苗 22 优秀中队 6 优秀小队 一年级 马歆晔 张瑜洋 陈临烟 郑伊灵，孙梓宜 陈彦菲，钱嘉恺 欧阳雨欣，...
中原大学艺术中心101学年度工读生徵选 工作内容： 协助艺术家布撤展 展场服务、导览解说 展览行销宣传：文宣发放、海报张贴 环境清洁 推广教育活动协助 办公室临时交办事项 ...
哈尔滨工业大学（威海）大学生志愿服务中心各部门职能简介 办公室 1.上传及下达志愿服务中心的各项会议精神，协调各部门的活动，组织例会，起草各种文字材料； 2.负责中心...
四川省哲学社会科学重点研究基地&羌学研究中心& 2013年度课题申报通知 & 四川省哲学社会科学重点研究基地&羌学研究中心&2013年度课题现正式发布。为做好本年度的课题...
市南区学年度第一学期幼儿园中心教研组研讨活动反馈表 组织者 于风丽 时间
地点 南京路第一幼儿园 研讨内容 &幼儿园集体教育活动有效性&研讨 各园出...
中正大学体育中心九十七学年度第一学期体育教学计划表 课目名称：体育一 课目代号： 授课年级：大一 一、任课老师： 詹丽云 二、办公室电话： 三、研究室电话：...
现代教育理论提倡以学生为中心，强调学生&学&的主动性，教师的作用体现在组织、指导、帮助和促进学生的学习，充分发挥学生的主动性、积极性和创造性，从而使学生最有效...
教代会记录等以及学校制度实施情况。 召开教师会或个别了解。 20 C2、制定符合学校实际的学校工作计划，并按计划全面落实工作。各职能部门工作计划能够围绕学校中心开展。...
人教版学年度七下语文期末测试卷（二） 一、语言积累与运用（20分） 1、依原文填空，每空填一字。（2分） 三个月后，那一团越发繁（ ）的绿（ ）里边，发出一种尖...
嘉定区教育局 3 迎园小学团支部 2006年度嘉定区教育系统&特色团组织&
区... 2006-12 区级 嘉定区青少年活动中心 7 迎园小学 新成路街道&我健身我快乐&健身操大... 年度上海市爱国卫生先进单位 2007-3 市级 上海市人事局 11 迎园小学 2005-...
无锡市学校管理中心学年度第二学期行事历 周次 起讫日期 主要工作12.20-2.22 开学工作检查（20-21日）
2 2.25-3.1 高中学业水平测试模拟考试（2.28-3.1）
3 3.4-3.8 ...
以教为中心和以学为中心的设计异同 作为一个教学活动序列，教学过程是由多个环节组成，这些环节相互联系、相互作用，不断延续。一般教学过程的主要环节有：导入、新知呈现...
关于2013年度省哲社重点研究基地省宋学研究中心 课题申报通知 浙江省宋学研究中心为浙江省哲学社会科学重点研究基地，依托单位为浙江大学。中心下设五个研究方向：宋明理...
四川省哲学社会科学重点研究基地&羌学研究中心& 2011年度课题申报通知& 四川省哲学社会科学重点研究基地&羌学研究中心&&十二五&规划2011年度课题现正式对外发布。...
人事代理人员登记表填表时间： 年月日姓名身份证号 性别籍贯民族文化程度 政治面貌 入党团时间 参加工作时间 婚姻状况 本人电话 现工作单位 邮政编码 家庭住址 联系人姓名 电子...
集店镇中心小学学年度第一学期一年级语文期末测试（人教版） 一、选合适的音节写在横线上。（20分） Zhi& p &an &z &ci &eng &shi &zi &x& ong &chi & ri &...
国立中正大学师资培育中心九十九学年度第一学期 科目名称：教育行动研究 英文译名：Educational Action Research 编号：350A015 学分数：2 周三3-4节 教育学院...
市南区学年度第一学期幼儿园中心教研组研讨出勤情况 组织者 于风丽 时间
地点 教育研究指导中心 研讨内容 &关注集体教育活动中整合教育， 促进幼儿...
成都中医药大学针灸推拿学院 四川省保健按摩技能培训中心 招生简章（保健按摩师） 职业工种 中医针灸推拿专业周末暨出国人员进修班 学制10周 课程内容 主修课程《中医学基础...
斜桥镇中心小学2012学年度家长学校工作组织机构 一、家长学校工作领导小组 组长：姚爱东 副组长：冯惠明、吴晓华 组员：许桂华、沈玉萍、钱金标。 二、家长学校工作校务委...
绣惠镇中心小学学年度第二学期周历表 周次 时间 工作安排 负责处室 1 2.18-2.19 传达学校工作要点，制定各类计划 校长室 2 2.21-2.25 制定各类教学计划， 完善学生素...
浙江大学宋学研究中心 2013年第1期（总第18期日 科研成果 按：我宋学研究中心张家成副教授学术专著《神圣与世俗：文化旅游视域中的&东南佛国&》已由浙江大...
学年度（下）桃花镇中心学校&同一起跑线& 课题研究工作计划 一、指导思想 树立语文教育整体观念，面向全体学生，实施全面发展教育。依据语文学科的特点，充分...
江苏省无锡市扬名中心小学学年度第二学期 第十二周工作安排 本周要求1、总结期中质量调研得失，调整教育教学方式、行为。 2、教育引导学生当伙伴有不文明或危...
江苏省无锡市扬名中心小学学年度第二学期 第十三周工作安排 本周要求1、教师从自身做起，自觉维护校园环境卫生。 2、教育引导学生尊敬父母，不任性，主动为家...
关于成立开县学年度高中学科中心教研组的 通知各高完中： 为充分发挥我县中学骨干教师的专业引领作用，进一步加强对高中教学研究与指导，大力推进新课程改革，...
绣惠镇中心小学学年度第二学期周历表 周次 时间具体内容负责处室12.25-3.1 寒假主题活动总结、宣传，开学第一天安全教育主题班会，开学典礼，文明行路启动仪式 ，...
孙疃中心学校学年度第一学期七年级学科竞赛 数学试卷 温馨提示：1、满分100分，考试时间50分钟 2、请将第1&&15小题答案填入背面相应的题号后 一、精心选一...
肥西县长岗学区中心学校12-13学年度（上）现代教育技术运用课堂教学大奖赛评选方案 一、指导思想： 为全面贯彻落实肥教字〔号文件精神，（要求每位教师每学期至...
第三条 人事代理人员实行聘用合同制，以聘用合同的方式确定聘期内学校与人事代理人员的权利和义务。 第四条 学校委托重庆市人才交流服务中心管理人事代理人员在代理期内档...
河北省人事考试局 冀人考发[2012]65号 关于做好2013年度全国卫生专业技术资格 考试工作有关问题的通知 各市人力资源和社会保障局人事（职称）考试中心、中省直有关单位人事...
山阳中心初中学年度第一学期 八年级数学教学案 姓名 学号 班级 教者 课题 &2.5实数（1） 课型 新授 时间 第二章第七课时 备课组成员 主备 李方龙 审核 教学目标 1.知道...
泰州市扬桥中心小学学年度第一学期 二年级数学期末试卷 成绩 一、细心计算。（24分） 1、直接写出各题得数。（16分） 6*1=9&3=54&6=30+5= 27&3=4*8=36&9=6*7= 3*5=9...
上海健民职业技能培训中心（上海中医药大学针灸推拿学院社会办学机构） 培训课程介绍5 & 培训项目 课程介绍 课程目标 学费 授课计划 课程考核 推拿功法易筋经 推拿功法易筋经...
中山大学肿瘤防治中心/华南肿瘤学国家重点实验室PI，国家杰出青年基金获得者，国家自然科学基金医学科学部专家评审组成员，中国细胞生物学学会理事会理事，中国抗癌协会肿...
101学年度中央有关机关联合访视侨生活动（南区）日程表 日期：101年10月12日（星期五） 时间：上午9时10分至下午5时30分 地点：国立高雄餐旅大学第三教学大楼国际會议厅...
（八）财团法人联合信用卡处理中心93年6月18日联卡企划字第931446号函附「国民旅游卡勾稽检核系统」学年度人员系统年度资料输入与更新时程乙案，人事单位须於7月20日前...
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