一、荧光分光光度法原理
(1)电孓激发态的多重度
单重激发态S:电子自旋方向和处于基态轨道的电子配对
三重激发态T:电子自旋方向和处于基态轨道的电子平行。
基态(S0)→激发态(S1、S2激发态振动能级):吸收特定频率的辐射
激发态→基态:多种途径和方式;速度最快、激发态寿命最短的途径占优势;
2. 激发光譜与荧光光谱
(1)荧光的激发光谱曲线
固定测量波长(选最大发射波长),化合物发射的荧光(磷光)强度与激发光波长的关系曲线 (图中曲线I ) 。噭发光谱曲线的最高处处于激发态的分子最多,荧光强度最大;
固定激发光波长, 化合物发射的荧光强度与发射光波长关系曲线(图中曲线II)问题:荧光(磷光)的激发光波长如何选择?Stokes位移:激发光谱与发射光谱之间的波长差值发射光谱的波长比激发光谱的长。
3. 荧光强度和溶液浓度的关系
4. 荧光、磷光分析方法的特点
比紫外-可见分光光度法高2~4个数量级;为什么
分光光度法所检测的是两个较大的信号的微小差別,荧光光度法检测的是很小背景值上的荧光强度
既可依据特征发射光谱,又可根据特征吸收光谱;
(4)可提供比较多的物理参数
缺点:应用范围小
二、荧光分光光度计的组成
测量荧光的仪器主要由四个部分组成:激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。特殊点:囿两个单色器光源与检测器成直角。基本流程如图:
单色器:选择激发光波长的第一单色器和选择发射光(测量)波长的第二单色器;
光源:氙灯和高压汞灯染料激光器
1. 无机化合物的分析
与有机试剂配合物后测量;可测量约60多种元素。
铍、铝、硼、镓、硒、镁、稀土常采用熒光分析法;
氟、硫、铁、银、钴、镍采用荧光熄灭法测定;
铜、铍、铁、钴、锇及过氧化氢采用催化荧光法测定;
铬、铌、铀、碲采用低温荧光法测定;
铈、铕、锑、钒、铀采用固体荧光法测定
2. 生物与有机化合物的分析见表 :
本文转自百度文库D粇,链接:
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