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　　Life Technologies提供了用于细胞功能和健康检测的各种试剂。其中许多分析以荧光或比色法为基础，具有灵敏性、便利性和安全性。这些产品已经过多种仪器平台验证，包括显微镜、流式细胞仪、酶标仪和高内涵筛选，能够实现各种细胞功能的分析：
细胞活性和细胞毒性
细胞增殖和细胞周期
内吞作用和吞噬作用
细胞内离子
本文为大家介绍细胞活性和毒性的产品
　　细胞活性和细胞毒性的荧光分析可与荧光显微镜、荧光计、荧光酶标仪或流式细胞仪配合使用，操作方便，与传统的比色法和放射性分析相比具有诸多优势。Life Technologies的细胞活性和细胞毒性分析试剂及试剂盒主要用于测定细胞群中活细胞和死细胞的比例。　　
　　LIVE/DEAD(R)细胞活性/毒性试剂盒提供了一种极其简单的基于荧光的分析方法，可用于测定贴壁或非贴壁细胞的活性以及细胞毒性。LIVE/DEAD(R) 分析专门采用两种单独的荧光探针区分活细胞与死细胞，Life Technologies开发出多种颜色的试剂盒，可用于流式细胞术、显微镜或微孔板检测。
产品特点：
操作简单——加样、孵育并分析；无需清洗步骤
功能多样——适用于贴壁细胞、非贴壁细胞及特定的组织
易于分析——通过不同的荧光可轻易地区分死/活细胞
&1) 适用于哺乳动物细胞的LIVE/DEAD(R)试剂盒&&
　　哺乳动物细胞LIVE/DEAD(R)试剂盒与荧光试剂结合使用，可通过两色区分活细胞群与死细胞群，且无需冲洗步骤。是高通量筛选、成像、荧光分析和流式细胞术的理想选择。
产品列表：
LIVE/DEAD(R) Viability/Cytotoxicity Kit *for mammalian cells*
Calcein AM
Ethidium homodimer-1
Green (Live)
Red (Dead)
LIVE/DEAD(R) Cell-Mediated Cytotoxicity Kit *for animal cells*
Green (Live)
Red (Dead)
LIVE/DEAD(R) Sperm Viability Kit
SYBR(R) 14 dye
Green (Live)
Red (Dead)
LIVE/DEAD(R) Cell Vitality Assay Kit *C12-resazurin/SYTOX(R) Green*
SYTOX(R) Green
C12-resazurin
Green (Dead)
Red (Live)
FCM: flow cytometry IF: Immunofluorescence M: microplate assay
图1. 活的以及经乙醇处死的牛肺上皮细胞混合物经LIVE/DEAD(R) Viability / ytotoxicity Kit(L3224)染色。活细胞显示绿色荧光，而死细胞则显橘红色。
图2. LIVE/DEAD(R) Sperm Viability Kit (L7011)染色精子。具有完整细胞膜的活精子被标记可透膜的核酸染料SYBR(R) 14，显示绿色荧光。死亡的精子则被PI标记，显示橘红色。
图3. Jurkat细胞加入10 μm喜树碱诱导，于37℃、5℃孵育4h后，经LIVE/DEAD(R) Cell Vitality Assay Kit (L34951)染色。根据SYTOX绿色荧光和resorufin荧光强度可将细胞分为活细胞、受损细胞和死细胞三群。
&2) 适用于细菌的试剂盒&&
　　LIVE/DEAD(R) BacLight(TM)细菌活性试剂盒提供了两种不同的核酸染料，可将质膜完整的活细菌(绿色荧光)与质膜不完整的死细菌(红色荧光)快速区分开来。 　　
产品列表：
LIVE/DEAD(R) BacLight(TM) Bacterial Viability Kit
485/530 485/630
Green (Live)
Red (Dead)
LIVE/DEAD(R) BacLight(TM) Bacterial Viability Kit
485/530 485/630
Green (Live)
Red (Dead)
LIVE/DEAD(R) BacLight(TM) Bacterial Viability Kit
485/530 485/630
Green (Live)
Red (Dead)
LIVE/DEAD(R) BacLight Bacterial Viability and Counting Kit
485/530 485/630
Green (Live)
Red (Dead)
FCM: flow cytometry IF: Immunofluorescence M: microplate assay
图4.使用LIVE/DEAD(R) BacLight(TM) Bacterial Viability Kit (L7007, L7012, L13152)鉴定酿脓链球菌上存活的和死亡的细菌。
图5.使用LIVE/DEAD(R) BacLight Bacterial Viability and Counting Kit (L34856)分析细菌培养物。活的和死亡的金黄色葡萄球菌(A和C)和大肠杆菌(B和D)经试剂盒染色后进行流式分析。使用绿色或红色荧光与SSC(A和B)区分出细菌和微球。通过红色和绿色荧光可区分出活细胞和死细胞(C和D)
&3) 适合酵母和真菌的试剂盒&&
　　　　LIVE/DEAD(R)酵母存活试剂盒提供了一种极为简单灵敏的分析方法，可用于区分复杂的混合物或不纯的培养物中的活酵母和真菌。
　　 LIVE/DEAD(R) Yeast Viability Kit采用新的双色荧光探针检测酵母细胞的活性。在具有完整浆膜和代谢功能的酵母中，FUN 1可由黄绿色的胞内荧光转变为橘红色的空泡内荧光，而无论代谢状态如何，Calcofluor White M2R都会与细胞壁结合，产生蓝色荧光。
　　 LIVE/DEAD(R) FungaLight(TM) Yeast Viability Kit则通过流式快速准确地鉴定死/活酵母细胞。绿色荧光的SYTO 9可与所有酵母细胞结合，而PI则只能进入细胞膜受损的酵母中，并降低SYTO 9的荧光，从而区分死细胞(红色荧光)和活细胞(绿色荧光)。
产品列表：
LIVE/DEAD(R) Yeast Viability Kit
Calcofluor White M2R
488/530 488/560-610
Green (All)
Red-orange (Live)
Blue (All)
LIVE/DEAD(R) FungaLight(TM) Yeast Viability Kit
485/530 485/630
Green (Live)
Red (Dead)
FCM: flow cytometry IF: Immunofluorescence M: microplate assay
图6. 使用LIVE/DEAD(R) Yeast Viability Kit (L7009)染色酿酒酵母，FUN 1在空泡内的产生红色荧光，而Calcofluor White M2R结合在细胞壁上发出蓝色荧光。
图7. 使用 LIVE/DEAD(R) FungaLight(TM) Yeast Viability Kit (L34952)染色酵母。A为根据FSC/SSC排除碎片，选择的酵母群设门。B为R1门中的酵母根据红色荧光和绿色荧光区分死细胞和活细胞。
&4) 可固定死细胞染色试剂盒&&
　　　　LIVE/DEAD(R) 可固定死亡细胞染色试剂盒采用了一种能与胺基起反应的荧光染料，通过流式细胞仪来测定哺乳动物细胞的活力。对于细胞膜受损的细胞，染料可与细胞内部及细胞表面的自由胺基相互作用而发出强烈的荧光。而对于活细胞，染料只能与细胞表面胺基相互作用，因而荧光强度较低。活细胞与死细胞荧光强度差别通常大于50倍，这一荧光强度的差别在甲醛固定后仍可完全保留下来。Life Techonlogies提供多种单一颜色的检测试剂盒以及多色检测试剂盒可供选择。 　　
产品特点：
保存时间长——染料为冻干粉，稳定
染色稳定——固定后保持原有染色类型，不会降低灵敏度
信号强——在单通道中能够轻易区分活/死细胞，可兼容多色分析
产品列表：
激发光(nm)
LIVE/DEAD(R) Fixable Blue Dead Cell Stain Kit
LIVE/DEAD(R) Fixable Violet Dead Cell Stain Kit
LIVE/DEAD(R) Fixable Aqua Dead Cell Stain Kit
LIVE/DEAD(R) Fixable Yellow Dead Cell Stain Kit
LIVE/DEAD(R) Fixable Green Dead Cell Stain Kit
LIVE/DEAD(R) Fixable Red Dead Cell Stain Kit
LIVE/DEAD(R) Fixable Far Red Dead Cell Stain Kit
LIVE/DEAD(R) Fixable Near-IR Dead Cell Stain Kit
LIVE/DEAD(R) Fixable Dead Cell Stain Sampler Kit
图8. 使用LIVE/DEAD(R) Fixable Violet Dead Cell Stain Kit (L34955)进行活细胞设门，排除假阳性。以散射光设门活细胞(A)会带入许多死细胞，造成染色的假阳性(C)；而用LIVE/DEAD(R) Fixable Violet染料设门活细胞(B)可消除死细胞带来的假阳性(D)。
　　SYTOX(R)染料为细胞非通透性的核酸染料，可以非常轻易地渗入质膜受损的真核细胞及革兰阳性和革兰阴性细菌内，但不会进入活细胞。由于它们无法穿过完整的细胞膜，与双链 DNA 结合而增加荧光强度，因此是最佳的死细胞染料。SYTOX(R) 死细胞染料易于使用，只需将其加入细胞并观察即可，它在水溶性培养基中不发出荧光，因此无需额外的清洗步骤。这些染料适用于多种平台，包括荧光显微镜、流式细胞仪和微孔板检测。　
产品特点：
准确：高亲和核酸染料，可轻松鉴定死细胞
灵活：多种颜色，光谱重叠极少，具有更佳的多色性能
简便：无需清洗步骤；只需加入、孵育并分析即可
可固定：固定后可维持染色形态，适用于胞内表型的简单活细胞、死细胞分析
SYTOX(R) Orange Nucleic Acid Stain - 5 mM Solution in DMSO
SYTOX(R) Green Nucleic Acid Stain - 5 mM Solution in DMSO
SYTOX(R) Blue Dead Cell Stain, for flow cytometry
SYTOX(R) Red Dead Cell Stain, for 633 or 635 nm excitation
SYTOX(R) Blue Nucleic Acid Stain - 5 mM Solution in DMSO
SelectFX(R) Nuclear Labeling Kit (DAPI, SYTOX(R) Green, 7-AAD, TO-PRO(R)-3 Iodide), for fixed cells
Dead Cell Apoptosis Kit with Annexin V APC and SYTOX(R) Green, for flow cytometry
Dead Cell Apoptosis Kit with Annexin V PE and SYTOX(R) Green, for flow cytometry
Single-Channel Dead Cell Apoptosis Kit with Annexin V Alexa Fluor(R) 488 and SYTOX(R) Green Dyes, for flow cytometry
Metabolic Activity Dead Cell Apoptosis Kit with C12 Resazurin, Annexin V APC, and SYTOX(R) Green, for flow cytometry
FluoCells(R) Prepared Slide #4 (mouse intestine section with Alexa Fluor(R) 350 WGA, Alexa Fluor(R) 568 Phalloidin, and SYTOX(R) Green)
SYTOX(R) Green Dead Cell Stain, for flow cytometry
SYTOX(R) Orange Dead Cell Stain, for flow cytometry
SYTOX(R) Dead Cell Stain Sampler Kit, for flow cytometry
图9. HeLa细胞经固定、破膜和RNA酶处理后，标记mouse anti-human Golgin-97 monoclonal antibody (A21270)和黄色荧光的Alexa Fluor(R) 430 goat anti-mouse IgG antibody (A11063)，F-actin以红色荧光的Alexa Fluor(R) 594 phalloidin (A12381)标记，细胞核以SYTOX(R) Green nucleic acid stain (S7020)标记。
图10. 未处理的和热处死的Jurkat细胞混合物经SYTOX(R) Blue Nucleic Acid Stain (S11348)染色5分钟后，在配置405nm紫光激发光的流式仪上进行检测。活细胞和死细胞可轻松地区分开。
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【求助/交流】LIVE/DEAD BacLight Bacterial Viability Kit荧光染液
请问有没有谁用过这个染色液的呀？在哪儿买的？除了invitrogen还有哪家公司有吗？想买次数少一点的，100次以内就行
你好，我刚买了live dead 的试剂盒，但是我不知道其中的mounting oil，就是你说的固定油是做什么用途的呢？染色需要用到它嘛？如能赐教，感激不尽呀！
请问大侠：LIVE/DEAD BacLight Bacterial Viability Kit是用来计数细菌的吗？
请问大侠：LIVE/DEAD BacLight Bacterial Viability Kit是用来计数细菌的吗？
请问大侠：LIVE/DEAD BacLight Bacterial Viability Kit是用来计数细菌的吗？
请问大侠：LIVE/DEAD BacLight Bacterial Viability Kit是用来计数细菌的吗？
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计死活的，你要是配合流式来用，也能计数
哦，明白了，O(∩_∩)O谢谢！
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土壤/底泥中微生物活菌计数
We counted live and dead bacteria in the sediment using the Live/Dead BacLight bacterial viability Kit, which contains a mixture of SYTO0 9 and propidium iodide。
在文献中看到这样一段话，请问这个the Live/Dead BacLight bacterial viability Kit （应该是个试剂盒吧）谁用过么。多少钱啊，计数的话，还需要别的工具吗？（除了显微镜）
染色前 土壤的均质化你是怎么做的，具体步骤能告诉我么
用DAPI先染色，再用异丙醇洗涤，前后拍照对比是不是也能区分活菌和死菌？
做正式实验之前，要做一些预实验去讨论 预处理对细菌死活的影响程度。我做的是活性污泥，浓度比较低 50-100mg-COD/L，先用微波预处理。
分析照片软件需要比较特殊的分析图像软件，照相机也不能随便一台就可以的，需要与显微镜配套使用的照相机才可以。
分析照片软件需要比较特殊的分析图像软件，照相机也不能随便一台就可以的，需要与显微镜配套使用的照相机才可以。
这些装备是有的。DAPI染色时，很多杂质也发荧光，但是颜色较浅，能够分辨出菌和非菌物质。比价烦的是杂质多，发的光亮度很大，会使细胞的蓝色荧光显得暗淡，拍照也显得不清楚，这个问题怎么解决呢。
在分析图像时，可以人为去除杂质部分的数据。我没有做过土壤样品，个人认为 是不是可以高倍稀释后高倍镜观测（比如1000倍等）？
稀释是必须的，但是菌数有限，稀释至2000倍时，每个视野的菌数大概都是个位数。你做活性污泥的染色，用不用超声波的？
问下你，国内做污水处理方面的大牛有哪些，推荐点文章看看
我在国外，还真不了解国内的情况。我出国后才转行做污水处理的。我个人觉得俞汉青不错，我的研究和他的相近。再就是 同济大学的几个老师听说也不错。昆士兰大学有个做水处理的老师也很好。北京的郝晓迪也不错，他老师是Mark。
╮(╯▽╰)╭，可惜我做的是河道底泥，而且我老板的要求是直接用 河道底泥总有机碳是否降低为指标 来筛菌，思路简单就是往底泥中投菌，测前后TOC的变化。因为测定这个指标的仪器实验室没有，我只能利用自己消解的办法测，有标准方法但是没相关仪器，自己拿实验室的东西改造了下，经常测不准。所以现在想从几个辅助指标入手，相互检验。
你觉得如果细菌能在底泥悬液中生长并繁殖，是否就能视为对底泥消解有一定作用呢？目前我是这么想的，不知你怎么看。
ps，你在国外读博？还是工作了?
可能你老师有你老师的想法，但从你传递的信息来看，这个底泥消解的定义及做法我不敢认同。很多好氧菌的C大部分是来自于CO2而不是来自于分解底泥。厌氧菌利用底泥中有机物进行生长，但是这也不能用TOC来测定，因为厌氧菌的C来自于外加C源 也就是底物，测前后的TOC势必一样呀。PS我在读博2。
目前我使用的菌基本为好氧或兼性好氧的芽孢杆菌，不以CO2为碳源；然后我们想的是，筛选出一种芽孢能分解掉底泥中的有机质，在它进行生长繁殖的同时，应该也能通过呼吸异化一点碳出去。所以，我想着是如果细菌能在只有底泥和水的条件下生存和繁殖，应该对有机碳就会有降低的作用。
ps，大哥在上 小弟这厢有礼了。:hand:
为什么SYTO9和PI都要用呢？他们分别是给什么染色的啊？我是超级菜鸟，但是我们做超滤膜的抗菌性实验时要用这个来分析膜片上附着的大肠杆菌的活死细胞的大体数目，请问要怎么做啊？
国内 郝晓迪 老师做过相关研究，你看看他的论文吧，其中有中文的 看起来比较好理解。
请问这个老师的论文要在哪找啊?我找不到哎
在 science direct 上搜索 water research 43 （2009） 等。
你好，我想请问一下你的live/dead baclight 试剂盒是什么规格的呀？能用几次呢？谢谢
这个得看你要做什么了，不同目的用的试剂盒也不同，只要不犯低级错误一般一个试剂盒做100-200次没有问题。
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求助：细菌live/dead染色，荧光倒置显微镜激发模块的选择
如题，目前正在测试用live dead baclight bacterial viability kit 对细菌进行染色，现在只看到了红色荧光的细菌。使用荧光倒置显微镜绿色激发，显示的全是红色上染的细菌，没有绿色上染的细菌。所以想问syto 9荧光应该用什么模块激发啊？荧光倒置该怎么滤光呢？
就是楼上说的那样哦，蓝色激发看syto 9，绿色激发看pI
自己回来拼合了一下，就是这样的了。但是这是空白样，结果死了一大片
QQ截图07.png
如5楼的图片，怎么保证空白样的细菌不死且绿色上染数量正确？
这个得看你养细菌的具体情况，每一步操作都注意点
能不能具体一些，或者说文献参考，已经养了几次了，都是这样，还希望亲能够不吝赐教
甘油管保存的菌种经过TSA培养后挑选一个3mm大小的菌落进入LB，培养到14-16h取出染色效果最好，能保证大部分是活菌。
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